【正文】 蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽性細菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲存條件參見試劑說明書。 送標本的時間在采集標本后超過2h。恥骨上皮膚經(jīng)碘酒消毒后，再以75％乙醇擦拭，用無菌注射器作膀胱穿刺，吸取尿液后排去注射器內(nèi)的空氣，針頭插于無菌橡皮塞上送檢。 男性　翻轉包皮，用肥皂水清洗尿道口，用清水沖洗，留取中段尿。參考文獻1 CNASGL23《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在臨床微生物學檢驗領域的應用指南》, 20082周庭銀編著. 臨床微生物學診斷與圖解. 第二版. 上海: 上?？茖W技術出版社, 20073 葉應嫵, 王毓三, . 第3版 .南京: 東南大學出版社, 20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則》, 2007江西省新余市人民醫(yī)院檢驗科微生物實驗室版 本 號：文件標題：尿液標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：尿液標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程1. 目的規(guī)范尿液標本細菌學標準操作規(guī)程，確保檢驗結果準確可靠。結核分枝桿菌引起結核性腦膜炎。 流感嗜血桿菌容易在外界環(huán)境中死亡，腦膜炎奈瑟菌對寒冷和干燥均很敏感，在體外容易自溶，故不論是涂片鏡檢還是進行培養(yǎng)均應及時送檢。7. 操作流程腦脊液離心觀察菌落特征及涂片、染色血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板5% CO2 35℃培養(yǎng)1824h發(fā)出報告儀器或手工細菌鑒定及藥敏試驗沉淀物涂片、染色8. 結果報告無論是涂片還是培養(yǎng)，一旦檢測到陽性細菌應立即電話或書面通知臨床醫(yī)師。 新生隱球菌涂片檢查　取腦脊液的離心沉淀物作墨汁負染色，或取腦脊液的離心沉淀物接種于沙氏培養(yǎng)基上，置于35℃培養(yǎng)2～5日，根據(jù)菌落特性，涂片染色鏡檢作出報告。6. 檢驗步驟接收標本后，立即對標本進行編號、登記。 VITEK鑒定系統(tǒng)。 標本拒收標準 標本標識與化驗申請單不符。3. 標本 標本類型　腦脊液。疑典型形態(tài)細菌所致肺部感染時，常先做痰液和支氣管分泌物涂片、染色鏡檢（如肺部結核痰液涂片、抗酸染色，鏡檢找抗酸染色陽性結核分枝桿菌，有助于細菌培養(yǎng)檢查。兒童細菌性肺炎多為流感嗜血桿菌所致。10. 臨床意義上呼吸道標本培養(yǎng)生長的細菌是否與疾病有關，需各方面綜合分析，排除常居菌后，才可作出正確的判斷。 未檢出致病菌時應報告“正常菌群”。 接種　處理后痰液接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱（或EMB、中國藍）瓊脂平板，置5％～10％CO2 環(huán)境中，35℃培養(yǎng)18～24 h。如查見中間部分的菌絲為革蘭陽性，而四周放射的末端為革蘭陰性，萋尼染色為非抗酸性者，可報告為”找到革蘭陽性桿菌疑似放線菌”。表530　痰標本鏡下分類分級白細胞（個）上皮細胞（個）A2510B2525C1025　　　　　　注：A、B兩種情況的痰標本適合做培養(yǎng)，C不合格，應重新留標本。6. 檢驗步驟接收標本后，立即對標本進行編號、登記。 VITEK鑒定系統(tǒng)。 痰標本留取放置時間太長，超過2h。 標本拒收標準 申請單姓名、科別、床號與標本的標簽不符。
　 　在留取痰之前，用清水反復漱口，應從氣管深部咳出痰，吐入無菌容器內(nèi)。參考文獻1 CNASGL23《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在臨床微生物學檢驗領域的應用指南》, 20082周庭銀編著. 臨床微生物學診斷與圖解. 第二版. 上海: 上海科學技術出版社, 20073 葉應嫵, 王毓三, . 第3版 .南京: 東南大學出版社, 20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則》, 2007江西省新余市人民醫(yī)院檢驗科微生物實驗室版 本 號：文件標題：呼吸系統(tǒng)標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：呼吸系統(tǒng)標本細菌學檢驗標準操作規(guī)程1. 目的規(guī)范呼吸道標本細菌學標準操作規(guī)程，確保檢驗結果準確可靠。引起感染性腹瀉的病原微生物有：①細菌性：產(chǎn)毒素型腹瀉，包括霍亂弧菌、腸毒素型大腸埃希菌等；侵襲型腹瀉，包括志賀菌、腸致病型大腸埃希菌和腸侵襲型大腸埃希菌等；食物中毒，包括沙門菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蠟樣芽胞桿菌和肉毒梭菌等；偽膜性腸炎，包括艱難梭菌或金黃色葡萄球菌；慢性腹瀉，可能由結核桿菌引起。
注意事項 空腸彎曲菌是微需氧菌，初次分離時需5%～10%CO2和85%氮。
　　 真菌培養(yǎng)　參見《結核分枝桿菌檢驗操作規(guī)程》?！?空腸彎曲菌培養(yǎng)　參見《彎曲菌屬檢驗操作規(guī)程》。
　　 致病性大腸埃希菌培養(yǎng)　參見《致病性大腸埃希菌檢驗操作規(guī)程》?！　?涂片檢查　糞便標本因各種正常菌群含量甚多，僅以染色性和形態(tài)無法分辨是否為病原菌。 接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、CO2 培養(yǎng)箱等。 送檢的糞便標本混有尿液。培養(yǎng)艱難梭菌的標本保存于20℃以下。3. 標本 標本類型　糞便，直腸拭子。胸腔感染的病原菌以結核分枝桿菌多見，其次是金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌等；腹腔感染的病原菌以腸道細菌如大腸埃希菌、糞腸球菌，以及結核分枝桿菌多見；心包炎和關節(jié)腔液以金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌等多見。 加入抗凝劑的標本（如胸腹水）采集后要與抗凝劑充分混勻并及時送檢。
結核分枝桿菌培養(yǎng)：參見《結核分枝桿菌檢驗操作規(guī)程》。次日觀察固體表面菌苔生長及瓶中液體是否混濁。 涂片檢查　膿性標本直接涂片。革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽性細菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲存條件參見試劑說明書。 標本不是無菌留取，容器不符合要求。3. 標本 標本類型　胸水、腹水、心包液、關節(jié)液、鞘膜液等。以接種針挑取細菌培養(yǎng)物，插入半固體培養(yǎng)基的中央，穿刺至培養(yǎng)基底部，然后沿原穿刺線退出接種針。用接種針（環(huán)）伸入菌種管內(nèi)挑取移種之菌落。將滅菌生理鹽水適量稀釋（通常作10－1～10－5稀釋）的標本1ml，置于滅菌平皿內(nèi)，注入已熔化并冷卻至50℃左右的培養(yǎng)基15ml，混勻，待冷卻后，倒置。用接種環(huán)先將標本涂布在平板第一區(qū)并作數(shù)次劃線，再在二、三……區(qū)依次用接種環(huán)劃線。參考文獻1 周庭銀編著，臨床微生物學診斷與圖解（第二版）.上?？茖W技術出版社,20072 葉應嫵，王毓三，：東南大學出版社，2006 江西省新余市人民醫(yī)院檢驗科微生物實驗室版 本 號：文件標題：標本接種標準操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：標本接種標準操作規(guī)程1. 目的 規(guī)范標本接種標準操作規(guī)程，確保檢驗結果準確可靠。接收標本后，立即對標本進行編號、登記，置孵育箱培養(yǎng)。 痰標本、登記后的痰標本，加入痰消化劑或無菌生理鹽水處理。 三級報告 報告細菌種屬、藥敏實驗、結果評價和建議。2. 范圍 血液、骨髓標本。培養(yǎng)2448小時。 無菌試驗 抽檢培養(yǎng)基數(shù)量：100塊以內(nèi)，隨機抽檢5%；100塊以上可隨機取10塊平皿或10支試管培養(yǎng)基進行無菌試驗。每個批號和（或）每次購買時，應進行外觀檢查并記錄。 無廠商特別說明時，不同批號的試劑不可混用。已經(jīng)檢驗的樣本應在保證其性能穩(wěn)定的條件下，將樣本以適當?shù)姆绞奖Ａ舻揭?guī)定時間內(nèi)，以便能在出具結果報告后可以復查，或做補充檢驗。 樣本采集和運輸 樣本采集人員應按照〈〈采集前病人識別程序〉〉確認病人，按照〈〈標本采集、運送程序〉〉采集樣本，并在規(guī)定的時間和溫度范圍內(nèi)，使用指定的運輸培養(yǎng)基，安全運送到微生物室。4． 程序 分析前質(zhì)量管理 檢驗申請單 臨床醫(yī)生應按照〈〈微生物檢測項目申請程序〉〉申請臨床微生物檢測。 結果上報截止日期之前嚴禁將質(zhì)控標本送至其他單位代做。 室間質(zhì)控樣本必須按實驗室常規(guī)工作進行，由進行常規(guī)工作的檢驗人員測試，必須使用實驗室的常規(guī)檢測方法和試劑，不得特殊對待。3. 職責 微生物檢驗人員均須熟知并遵守本程序。 檢驗過程的質(zhì)量控制 細菌分離和鑒定 根據(jù)檢驗目的選擇培養(yǎng)基，選擇病原菌進行鑒定。 商品化培養(yǎng)基應嚴格驗收，并保存質(zhì)控合格證明文件。在儀器投入使用、修理或退役之前對其去污染。操作者應可以方便取閱儀器標準操作規(guī)程以及儀器維護信息。 每件儀器具有唯一性標識。參見《結果報告程序》。參見《微生物檢測項目申請程序》。 人員 包括學歷、職稱等要求，員工的培訓和工作能力評估。 范圍適用于微生物實驗室的各個檢驗項目。9． 分離出甲類或乙類傳染病菌株，應及時上報院感科，未經(jīng)上級同意不得帶出 實驗室，并由專人處理。5． 實驗室每天用紫外線進行消毒空氣，作好記錄，并定期檢測；接種環(huán)（針）使用后應立即在火焰燈上燒灼滅菌；沾有活菌的玻片、試管等玻璃制品應立即消毒滅菌；檢測剩余的標本及接觸過微生物的平板、鑒定板（條）等塑料制品均用塑料袋裝好，置黃色桶內(nèi)，統(tǒng)一滅菌處理。2． 進入實驗室要穿工作服，工作服要放在指定的地點，并經(jīng)常洗滌；生活用品不能帶入實驗室。4． 禁止用手處理破損的玻璃器具，裝有污染的針、利器及破損玻璃的容器在丟棄前必須滅菌。江西省新余市人民醫(yī)院檢驗科微生物實驗室版 本 號：文件標題：尖銳器具安全使用制度文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：尖銳器具安全使用制度1． 除特殊情況下，禁止在實驗室使用針、注射器及其它利器，盡可能使用塑料器材代替玻璃器材。特殊標本（如腦脊液、前列腺液、白帶等）應立即送檢并接種。如污染工作服，應立即脫下，高壓滅菌。（細菌、支原體、真菌等培養(yǎng)物），不管標本陽性或陰性均用1000g/L含氯消毒劑浸泡消毒液浸泡后，經(jīng)煮沸消毒，才能清洗或丟棄。 江西省新余市人民醫(yī)院檢驗科微生物實驗室版 本 號：文件標題：微生物實驗室消毒隔離措施制度文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：微生物實驗室消毒隔離措施制度，上班前、下班后開紫外燈（40分鐘）進行空氣消毒。4． 各種菌種應按規(guī)定時間接種，一般在接種三次后作一次全面的鑒定，注意菌種有無污染及變異，如發(fā)現(xiàn)變異時，應及時更換。 江西省新余市人民醫(yī)院檢驗科微生物實驗室版 本 號：文件標題：病原微生物保存制度文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：病原微生物保存制度1． 據(jù)《病原微生物安全條例》要求實驗室不能保存高致性病原微生物菌（毒）種。易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必須遠離火源，妥善保存。，接種環(huán)用完后應立即火焰滅菌，沾菌吸管、玻片等用后應浸泡在消毒液內(nèi)。盡量減少室內(nèi)活動，以免引起風動，無關人員禁入。3． 紫外線燈管每月用無水酒精擦拭；每半年由院感科對紫外線燈管進行紫外線強度（消毒效果）測試，并標明測試。培養(yǎng)基：每周準備好下一周培養(yǎng)基的用量，保證實驗室正常進行。 設置試劑警戒線應當考慮到：試劑供貨周期的長短；試劑有效期長短；質(zhì)控試驗需要的時間（要保證新進試劑一旦失控時，實驗室仍有足夠試劑保證試驗的正常進行）。高壓滅菌時須貼指示帶監(jiān)測滅菌效果。 驗收時應注意培養(yǎng)基是否有標識(包括培養(yǎng)基名稱、批號、生產(chǎn)日期、失效日期)，包裝是否完整，培養(yǎng)基是否破損、污染，外觀是否良好（良好培養(yǎng)基應該是表面平滑，水分，顏色、厚度適宜，無污染）等。當試劑存放量接近警戒線時，應及時通知負責人訂購下一批試劑。 試劑使用 使用前，工作人員應確認：試劑處于有效期內(nèi)、質(zhì)控合格、標識明確、儲存條件