【正文】 培養(yǎng)。 標(biāo)本保存采集標(biāo)本后立即送到實驗室，放置時間不應(yīng)超過2h。 涂片檢查　可以確定標(biāo)本是否適合做細菌培養(yǎng)，直接涂片鏡檢，依據(jù)低倍鏡下觀察白細胞和上皮細胞數(shù)目多少來評定，見下表530。
　 分離培養(yǎng) 培養(yǎng)標(biāo)本的選擇　應(yīng)選擇黏液膿痰作涂片，排除不合格標(biāo)本。，其毒力很低，但由拔牙等原因造成的局部損傷中侵入血流，可引起亞急性細菌性心內(nèi)膜炎等感染，故從血液中分離出草綠色鏈球菌有臨床意義。肺結(jié)核由結(jié)核分枝桿菌引起的。腦膜炎奈瑟菌離體后能產(chǎn)生自溶酶，迅速自溶，肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌離體后也易死亡。 接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、CO2 培養(yǎng)箱等。
分離培養(yǎng) 用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或經(jīng)離心沉淀的沉淀物，分別接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱平板，置于5%~10%CO2 環(huán)境中35℃培養(yǎng)18～24 h，觀察細菌生長情況，根據(jù)菌落特點、形態(tài)與染色及生化反應(yīng)鑒定細菌，并作藥敏試驗?；撔阅X膜炎最多見腦膜炎奈瑟菌，肺炎鏈球菌居第二位。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類型　尿液。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 申請單項目與標(biāo)本不符。
。 送標(biāo)本的時間在采集標(biāo)本后超過2h。 男性　翻轉(zhuǎn)包皮，用肥皂水清洗尿道口，用清水沖洗，留取中段尿。結(jié)核分枝桿菌引起結(jié)核性腦膜炎。7. 操作流程腦脊液離心觀察菌落特征及涂片、染色血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板5% CO2 35℃培養(yǎng)1824h發(fā)出報告儀器或手工細菌鑒定及藥敏試驗沉淀物涂片、染色8. 結(jié)果報告無論是涂片還是培養(yǎng)，一旦檢測到陽性細菌應(yīng)立即電話或書面通知臨床醫(yī)師。6. 檢驗步驟接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進行編號、登記。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 標(biāo)本標(biāo)識與化驗申請單不符。疑典型形態(tài)細菌所致肺部感染時，常先做痰液和支氣管分泌物涂片、染色鏡檢（如肺部結(jié)核痰液涂片、抗酸染色，鏡檢找抗酸染色陽性結(jié)核分枝桿菌，有助于細菌培養(yǎng)檢查。10. 臨床意義上呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)生長的細菌是否與疾病有關(guān)，需各方面綜合分析，排除常居菌后，才可作出正確的判斷。 接種　處理后痰液接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱（或EMB、中國藍）瓊脂平板，置5％～10％CO2 環(huán)境中，35℃培養(yǎng)18～24 h。表530　痰標(biāo)本鏡下分類分級白細胞（個）上皮細胞（個）A2510B2525C1025　　　　　　注：A、B兩種情況的痰標(biāo)本適合做培養(yǎng)，C不合格，應(yīng)重新留標(biāo)本。 VITEK鑒定系統(tǒng)。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 申請單姓名、科別、床號與標(biāo)本的標(biāo)簽不符。參考文獻1 CNASGL23《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用指南》, 20082周庭銀編著. 臨床微生物學(xué)診斷與圖解. 第二版. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 20073 葉應(yīng)嫵, 王毓三, . 第3版 .南京: 東南大學(xué)出版社, 20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認可準(zhǔn)則》, 2007江西省新余市人民醫(yī)院檢驗科微生物實驗室版 本 號：文件標(biāo)題：呼吸系統(tǒng)標(biāo)本細菌學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：呼吸系統(tǒng)標(biāo)本細菌學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的規(guī)范呼吸道標(biāo)本細菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
注意事項 空腸彎曲菌是微需氧菌，初次分離時需5%～10%CO2和85%氮?！?空腸彎曲菌培養(yǎng)　參見《彎曲菌屬檢驗操作規(guī)程》?！　?涂片檢查　糞便標(biāo)本因各種正常菌群含量甚多，僅以染色性和形態(tài)無法分辨是否為病原菌。 送檢的糞便標(biāo)本混有尿液。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類型　糞便，直腸拭子。 加入抗凝劑的標(biāo)本（如胸腹水）采集后要與抗凝劑充分混勻并及時送檢。次日觀察固體表面菌苔生長及瓶中液體是否混濁。革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽性細菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲存條件參見試劑說明書。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類型　胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、鞘膜液等。用接種針（環(huán)）伸入菌種管內(nèi)挑取移種之菌落。用接種環(huán)先將標(biāo)本涂布在平板第一區(qū)并作數(shù)次劃線，再在二、三……區(qū)依次用接種環(huán)劃線。接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進行編號、登記，置孵育箱培養(yǎng)。 三級報告 報告細菌種屬、藥敏實驗、結(jié)果評價和建議。培養(yǎng)2448小時。每個批號和（或）每次購買時，應(yīng)進行外觀檢查并記錄。已經(jīng)檢驗的樣本應(yīng)在保證其性能穩(wěn)定的條件下，將樣本以適當(dāng)?shù)姆绞奖Ａ舻揭?guī)定時間內(nèi)，以便能在出具結(jié)果報告后可以復(fù)查，或做補充檢驗。4． 程序 分析前質(zhì)量管理 檢驗申請單 臨床醫(yī)生應(yīng)按照〈〈微生物檢測項目申請程序〉〉申請臨床微生物檢測。 室間質(zhì)控樣本必須按實驗室常規(guī)工作進行，由進行常規(guī)工作的檢驗人員測試，必須使用實驗室的常規(guī)檢測方法和試劑，不得特殊對待。 檢驗過程的質(zhì)量控制 細菌分離和鑒定 根據(jù)檢驗?zāi)康倪x擇培養(yǎng)基，選擇病原菌進行鑒定。在儀器投入使用、修理或退役之前對其去污染。 每件儀器具有唯一性標(biāo)識。參見《微生物檢測項目申請程序》。 范圍適用于微生物實驗室的各個檢驗項目。5． 實驗室每天用紫外線進行消毒空氣，作好記錄，并定期檢測；接種環(huán)（針）使用后應(yīng)立即在火焰燈上燒灼滅菌；沾有活菌的玻片、試管等玻璃制品應(yīng)立即消毒滅菌；檢測剩余的標(biāo)本及接觸過微生物的平板、鑒定板（條）等塑料制品均用塑料袋裝好，置黃色桶內(nèi)，統(tǒng)一滅菌處理。4． 禁止用手處理破損的玻璃器具，裝有污染的針、利器及破損玻璃的容器在丟棄前必須滅菌。特殊標(biāo)本（如腦脊液、前列腺液、白帶等）應(yīng)立即送檢并接種。（細菌、支原體、真菌等培養(yǎng)物），不管標(biāo)本陽性或陰性均用1000g/L含氯消毒劑浸泡消毒液浸泡后，經(jīng)煮沸消毒，才能清洗或丟棄。4． 各種菌種應(yīng)按規(guī)定時間接種，一般在接種三次后作一次全面的鑒定，注意菌種有無污染及變異，如發(fā)現(xiàn)變異時，應(yīng)及時更換。易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必須遠離火源，妥善保存。盡量減少室內(nèi)活動，以免引起風(fēng)動，無關(guān)人員禁入。培養(yǎng)基：每周準(zhǔn)備好下一周培養(yǎng)基的用量，保證實驗室正常進行。高壓滅菌時須貼指示帶監(jiān)測滅菌效果。當(dāng)試劑存放量接近警戒線時，應(yīng)及時通知負責(zé)人訂購下一批試劑。 試劑儲存 所有試劑應(yīng)按產(chǎn)商要求儲存以防損壞、降解、污染。每批試劑到貨后由實驗室負責(zé)人或其指定人員驗收。8. 工作結(jié)束后，用500mg/L含氯消毒劑溶液消毒工作臺面；工作人員雙手應(yīng)用肥皂、流水清洗三遍以上，關(guān)好窗戶、檢查好電源后，方可離開實驗室。【主要內(nèi)容】1. 加強學(xué)習(xí)，嚴(yán)格執(zhí)行安全制度，定期檢查。消毒后發(fā)放。5. 做好檢驗科、輸血科實驗室臺面、地面、空氣消毒。4. 負責(zé)集中所有檢驗后標(biāo)本、培養(yǎng)出的菌株、一次性用品用后的消毒處理。6. 各種器具（鉗子、消毒罐）應(yīng)及時消毒、清洗；各種廢棄標(biāo)本應(yīng)分類處理（焚燒、入污水池、消毒或滅菌）?！具m用范圍】臨床微生物實驗室檢驗人員【該SOP變動程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。7. 易燃、易爆、劇毒化學(xué)物品要有專人保管，并有使用記錄；分離出甲類或乙類傳染病菌株，應(yīng)及時上報院感科，未經(jīng)上級同意不得帶出實驗室，并由專人處理。程序 試劑 試劑的評估、申購、驗收 用于檢測標(biāo)本的試劑必須堅持高質(zhì)量、高安全性的標(biāo)準(zhǔn)，由實驗室負責(zé)人評估、訂購。標(biāo)識內(nèi)容包括：試劑名稱、量、濃度、或滴度、儲存條件、配制日期、失效日期（如果開瓶改變試劑有效期，必須重新登記）。取用試劑應(yīng)按有效期先后取用，標(biāo)明開瓶日期、有效期、開瓶人簽名。 自制培養(yǎng)基 應(yīng)嚴(yán)格遵守SOP配制,由勤雜人員高壓滅菌。鑒定卡：GNI+：定為剩盒時預(yù)定下一批；GPI：定為剩盒時預(yù)定下一批；GNS：定為剩盒時預(yù)定下一批；GPS：定為剩盒時預(yù)定下一批……血培養(yǎng)瓶：定為剩箱時預(yù)定下一批。，不準(zhǔn)吸煙、吃東西及用手觸摸面部。，應(yīng)沉著處理，切勿慌張，立即關(guān)閉電閘，積極滅火。3． 菌種應(yīng)有嚴(yán)格的登記，包括形態(tài)，分離日期，鑒定日期，簽發(fā)者，主要鑒定性能（包括形態(tài)、染色、抗原結(jié)構(gòu)、動物致病力等），并注明使用、轉(zhuǎn)移、銷毀情況及原因。，所有用于試驗的反應(yīng)板、吸頭等用1000g/L含氯消毒劑浸泡消毒液浸泡（至少24小時以上）后清洗或丟棄。2． 病原微生物的培養(yǎng)標(biāo)本必須在2小時內(nèi)由輸送中心送檢并立即按種。3． 盡可能使用無針注射器和其它安全裝置。4． 感染物污染桌面或地面應(yīng)立即用500g/L含氯消毒劑消毒劑溶液覆蓋其上，經(jīng)30分鐘方可抹去，如工作服被病原微生物污染，應(yīng)立即脫下，進行高壓滅菌處理。 江西省新余市人民醫(yī)院檢驗科微生物實驗室版 本 號：文件標(biāo)題：微生物實驗室質(zhì)量管理制度文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：微生物實驗室質(zhì)量管理制度 目的規(guī)范質(zhì)量管理程序，保證檢驗的質(zhì)量。 申請單 申請單應(yīng)包含：病人信息、申請醫(yī)生姓名或工號、申請科室、申請項目、標(biāo)本種類、標(biāo)本采集和接收時間，必要時應(yīng)標(biāo)明臨床診斷、采樣部位、抗菌藥物的應(yīng)用情況、預(yù)期微生物的種類等。 儀器質(zhì)量管理 儀器在安裝時及常規(guī)使用中應(yīng)滿足檢驗所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并具有達標(biāo)的證明文件。 一旦發(fā)現(xiàn)儀器故障，應(yīng)停止使用，清楚標(biāo)記后妥善存放至其被修復(fù)。 樣本的質(zhì)量控制，參見《樣本采集、運送程序》。 質(zhì)控標(biāo)本的接收和驗收 收到質(zhì)控物后由相關(guān)人員登記、簽字，根據(jù)質(zhì)控標(biāo)本的有關(guān)說明對質(zhì)控物的數(shù)量、批號、包裝進行驗收并將質(zhì)控標(biāo)本按要求保存。3． 職責(zé)實驗室檢驗人員均須熟知并遵守本程序。 樣本儲存 微生物實驗室接種崗位檢驗人員按照〈〈微生物標(biāo)本檢驗前儲存程序〉〉正確儲存未能及時處理的標(biāo)本。 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 購買的有質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)基 實驗室應(yīng)保存制造商所遵循的質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)，以及每批號產(chǎn)品完成無菌試驗、生長試驗、生化試驗及質(zhì)量控制性能的合格證明等文件；無質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)基，每批號和（或）每次購買的產(chǎn)品應(yīng)檢測相應(yīng)的性能，包括生長試驗或與舊批號平行試驗、生長抑制試驗（適用時）、生化試驗（適用時）等。無菌生理鹽水1：100稀釋，每塊平板接種10ul（濃度相當(dāng)于10~310~4CFU/平板）。 二級報告 報告直接藥敏試驗結(jié)果。、胸腹水等穿刺液床邊抽取體液標(biāo)本1～2ml注入多功能體液培養(yǎng)瓶或需氧血培養(yǎng)瓶，即送實驗室。4. 程序此法多用于糞便等含菌量較多的標(biāo)本。用右手小指與手掌、小指與無名指分別拔出兩管的棉塞，將管口通過火焰滅菌。2. 適用范圍穿刺液標(biāo)本培養(yǎng)。、多功能體液培養(yǎng)瓶、VITEK鑒定系統(tǒng)。 增菌分離培養(yǎng)法　將多功能體液培養(yǎng)瓶顛倒混勻使液體覆蓋整個固體面，然后置35℃孵育箱培養(yǎng)（固體面在上，液體在下）。9. 注意事項 標(biāo)本的采集一定要嚴(yán)格履行無菌操作技術(shù)，避免污染。2. 適用范圍糞便培養(yǎng)。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 糞便標(biāo)本放置時間超過2h。6. 檢驗步驟接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進行編號、登記。
　　 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌培養(yǎng)　參見《耶爾森菌屬檢驗操作規(guī)程》。7. 操作流程糞便或肛拭需氧培養(yǎng)根據(jù)臨床要求分離致病性大腸埃希菌O157SS、XLD或HE平板35℃培養(yǎng)18～24 h麥康凱平板分離彎曲菌分離弧菌TCBS平板CampyBA平板35℃微需氧培養(yǎng)48 h山梨醇麥康凱平板觀察菌落特征及涂片、染色觀察菌落特征及涂片、染色血清學(xué)鑒定儀器或手工細菌鑒定及藥敏試驗發(fā)出報告雙糖鐵或三糖鐵試驗觀察菌落特征及涂片、染色血清學(xué)鑒定發(fā)出報告儀器或手工細菌鑒定及藥敏試驗發(fā)出報告儀器或手工細菌鑒定及藥敏試驗8. 結(jié)果報告9. 查出腸道致病菌，報告其菌名和藥敏結(jié)果。11. 危急值報告培養(yǎng)出霍亂弧菌、傷寒沙門菌、O157等及時按傳染病報告，同時送CDC復(fù)核。 棉拭采集法　用無菌棉拭子輕輕擦拭患者鼻咽部黏膜，留取標(biāo)本，置無菌試管內(nèi)送檢。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)生化試劑等。并可初步判定是否有病原菌存在。 痰標(biāo)本培養(yǎng)前處理　用無菌鹽水將痰洗滌或加入等量的1%胰酶溶液，使痰液均質(zhì)化后備用。 咳痰標(biāo)本不做厭氧菌培養(yǎng)。嗜肺軍團菌引起軍團菌病，肺部厭氧感染大多是脆弱類桿菌及梭桿菌屬的細菌等。因此，腦脊液無論涂片或培養(yǎng)，必須于采集后立即送檢。5. 細菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見質(zhì)量管理。 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗操作規(guī)程》。3個月至5歲兒童細菌性腦膜炎的主要致病菌是流感嗜血桿菌，新生兒腦膜炎多由大腸埃希菌、B群溶血性鏈球菌和腦膜敗血黃桿菌引起的，特別是早產(chǎn)嬰兒。 標(biāo)本采集 中段尿標(biāo)本采集法
　　 女性　先以肥皂水清洗外陰部，再以無菌水沖洗，用無菌紗布擦拭，以手指將陰唇分開排尿，棄去前段尿，留取中段尿5～7ml于無菌試管內(nèi)。 尿標(biāo)本不是用無菌