【正文】 尿標(biāo)本不是用無菌容器留取。3個(gè)月至5歲兒童細(xì)菌性腦膜炎的主要致病菌是流感嗜血桿菌，新生兒腦膜炎多由大腸埃希菌、B群溶血性鏈球菌和腦膜敗血黃桿菌引起的，特別是早產(chǎn)嬰兒。5. 細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見質(zhì)量管理。嗜肺軍團(tuán)菌引起軍團(tuán)菌病，肺部厭氧感染大多是脆弱類桿菌及梭桿菌屬的細(xì)菌等。 痰標(biāo)本培養(yǎng)前處理　用無菌鹽水將痰洗滌或加入等量的1%胰酶溶液，使痰液均質(zhì)化后備用。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)生化試劑等。11. 危急值報(bào)告培養(yǎng)出霍亂弧菌、傷寒沙門菌、O157等及時(shí)按傳染病報(bào)告，同時(shí)送CDC復(fù)核。
　　 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌培養(yǎng)　參見《耶爾森菌屬檢驗(yàn)操作規(guī)程》。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 糞便標(biāo)本放置時(shí)間超過2h。9. 注意事項(xiàng) 標(biāo)本的采集一定要嚴(yán)格履行無菌操作技術(shù)，避免污染。、多功能體液培養(yǎng)瓶、VITEK鑒定系統(tǒng)。用右手小指與手掌、小指與無名指分別拔出兩管的棉塞，將管口通過火焰滅菌。、胸腹水等穿刺液床邊抽取體液標(biāo)本1～2ml注入多功能體液培養(yǎng)瓶或需氧血培養(yǎng)瓶，即送實(shí)驗(yàn)室。無菌生理鹽水1：100稀釋，每塊平板接種10ul（濃度相當(dāng)于10~310~4CFU/平板）。 樣本儲(chǔ)存 微生物實(shí)驗(yàn)室接種崗位檢驗(yàn)人員按照〈〈微生物標(biāo)本檢驗(yàn)前儲(chǔ)存程序〉〉正確儲(chǔ)存未能及時(shí)處理的標(biāo)本。 質(zhì)控標(biāo)本的接收和驗(yàn)收 收到質(zhì)控物后由相關(guān)人員登記、簽字，根據(jù)質(zhì)控標(biāo)本的有關(guān)說明對(duì)質(zhì)控物的數(shù)量、批號(hào)、包裝進(jìn)行驗(yàn)收并將質(zhì)控標(biāo)本按要求保存。 一旦發(fā)現(xiàn)儀器故障，應(yīng)停止使用，清楚標(biāo)記后妥善存放至其被修復(fù)。 申請(qǐng)單 申請(qǐng)單應(yīng)包含：病人信息、申請(qǐng)醫(yī)生姓名或工號(hào)、申請(qǐng)科室、申請(qǐng)項(xiàng)目、標(biāo)本種類、標(biāo)本采集和接收時(shí)間，必要時(shí)應(yīng)標(biāo)明臨床診斷、采樣部位、抗菌藥物的應(yīng)用情況、預(yù)期微生物的種類等。4． 感染物污染桌面或地面應(yīng)立即用500g/L含氯消毒劑消毒劑溶液覆蓋其上，經(jīng)30分鐘方可抹去，如工作服被病原微生物污染，應(yīng)立即脫下，進(jìn)行高壓滅菌處理。2． 病原微生物的培養(yǎng)標(biāo)本必須在2小時(shí)內(nèi)由輸送中心送檢并立即按種。3． 菌種應(yīng)有嚴(yán)格的登記，包括形態(tài)，分離日期，鑒定日期，簽發(fā)者，主要鑒定性能（包括形態(tài)、染色、抗原結(jié)構(gòu)、動(dòng)物致病力等），并注明使用、轉(zhuǎn)移、銷毀情況及原因。，不準(zhǔn)吸煙、吃東西及用手觸摸面部。 自制培養(yǎng)基 應(yīng)嚴(yán)格遵守SOP配制,由勤雜人員高壓滅菌。標(biāo)識(shí)內(nèi)容包括：試劑名稱、量、濃度、或滴度、儲(chǔ)存條件、配制日期、失效日期（如果開瓶改變?cè)噭┯行?，必須重新登記）?. 易燃、易爆、劇毒化學(xué)物品要有專人保管，并有使用記錄；分離出甲類或乙類傳染病菌株，應(yīng)及時(shí)上報(bào)院感科，未經(jīng)上級(jí)同意不得帶出實(shí)驗(yàn)室，并由專人處理。6. 各種器具（鉗子、消毒罐）應(yīng)及時(shí)消毒、清洗；各種廢棄標(biāo)本應(yīng)分類處理（焚燒、入污水池、消毒或滅菌）。5. 做好檢驗(yàn)科、輸血科實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面、空氣消毒?！局饕獌?nèi)容】1. 加強(qiáng)學(xué)習(xí)，嚴(yán)格執(zhí)行安全制度，定期檢查。每批試劑到貨后由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或其指定人員驗(yàn)收。當(dāng)試劑存放量接近警戒線時(shí)，應(yīng)及時(shí)通知負(fù)責(zé)人訂購下一批試劑。培養(yǎng)基：每周準(zhǔn)備好下一周培養(yǎng)基的用量，保證實(shí)驗(yàn)室正常進(jìn)行。易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必須遠(yuǎn)離火源，妥善保存。（細(xì)菌、支原體、真菌等培養(yǎng)物），不管標(biāo)本陽性或陰性均用1000g/L含氯消毒劑浸泡消毒液浸泡后，經(jīng)煮沸消毒，才能清洗或丟棄。4． 禁止用手處理破損的玻璃器具，裝有污染的針、利器及破損玻璃的容器在丟棄前必須滅菌。 范圍適用于微生物實(shí)驗(yàn)室的各個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目。 每件儀器具有唯一性標(biāo)識(shí)。 檢驗(yàn)過程的質(zhì)量控制 細(xì)菌分離和鑒定 根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康倪x擇培養(yǎng)基，選擇病原菌進(jìn)行鑒定。4． 程序 分析前質(zhì)量管理 檢驗(yàn)申請(qǐng)單 臨床醫(yī)生應(yīng)按照〈〈微生物檢測(cè)項(xiàng)目申請(qǐng)程序〉〉申請(qǐng)臨床微生物檢測(cè)。每個(gè)批號(hào)和（或）每次購買時(shí)，應(yīng)進(jìn)行外觀檢查并記錄。 三級(jí)報(bào)告 報(bào)告細(xì)菌種屬、藥敏實(shí)驗(yàn)、結(jié)果評(píng)價(jià)和建議。用接種環(huán)先將標(biāo)本涂布在平板第一區(qū)并作數(shù)次劃線，再在二、三……區(qū)依次用接種環(huán)劃線。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類型　胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、鞘膜液等。次日觀察固體表面菌苔生長及瓶中液體是否混濁。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類型　糞便，直腸拭子?！　?涂片檢查　糞便標(biāo)本因各種正常菌群含量甚多，僅以染色性和形態(tài)無法分辨是否為病原菌。
注意事項(xiàng) 空腸彎曲菌是微需氧菌，初次分離時(shí)需5%～10%CO2和85%氮。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 申請(qǐng)單姓名、科別、床號(hào)與標(biāo)本的標(biāo)簽不符。表530　痰標(biāo)本鏡下分類分級(jí)白細(xì)胞（個(gè)）上皮細(xì)胞（個(gè)）A2510B2525C1025　　　　　　注：A、B兩種情況的痰標(biāo)本適合做培養(yǎng)，C不合格，應(yīng)重新留標(biāo)本。10. 臨床意義上呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)生長的細(xì)菌是否與疾病有關(guān)，需各方面綜合分析，排除常居菌后，才可作出正確的判斷。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 標(biāo)本標(biāo)識(shí)與化驗(yàn)申請(qǐng)單不符。7. 操作流程腦脊液離心觀察菌落特征及涂片、染色血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板5% CO2 35℃培養(yǎng)1824h發(fā)出報(bào)告儀器或手工細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)沉淀物涂片、染色8. 結(jié)果報(bào)告無論是涂片還是培養(yǎng)，一旦檢測(cè)到陽性細(xì)菌應(yīng)立即電話或書面通知臨床醫(yī)師。 男性　翻轉(zhuǎn)包皮，用肥皂水清洗尿道口，用清水沖洗，留取中段尿。
。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類型　尿液。
分離培養(yǎng) 用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或經(jīng)離心沉淀的沉淀物，分別接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱平板，置于5%~10%CO2 環(huán)境中35℃培養(yǎng)18～24 h，觀察細(xì)菌生長情況，根據(jù)菌落特點(diǎn)、形態(tài)與染色及生化反應(yīng)鑒定細(xì)菌，并作藥敏試驗(yàn)。腦膜炎奈瑟菌離體后能產(chǎn)生自溶酶，迅速自溶，肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌離體后也易死亡。，其毒力很低，但由拔牙等原因造成的局部損傷中侵入血流，可引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎等感染，故從血液中分離出草綠色鏈球菌有臨床意義。 涂片檢查　可以確定標(biāo)本是否適合做細(xì)菌培養(yǎng)，直接涂片鏡檢，依據(jù)低倍鏡下觀察白細(xì)胞和上皮細(xì)胞數(shù)目多少來評(píng)定，見下表530。
　 氣管穿刺法　在環(huán)甲膜下穿刺抽取痰液，收集標(biāo)本，適用于厭氧菌培養(yǎng)。 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。5. 細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見質(zhì)量管理。參考文獻(xiàn)1 CNASGL23《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用指南》, 20082周庭銀編著. 臨床微生物學(xué)診斷與圖解. 第二版. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 20073 葉應(yīng)嫵, 王毓三, . 第3版 .南京: 東南大學(xué)出版社, 20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》, 2007江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號(hào)：糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的規(guī)范糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。 分離培養(yǎng)
　　 一般細(xì)菌培養(yǎng)　接種血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板（或EMB及中國藍(lán)瓊脂平板），5％～10％CO2 條件下，35℃培養(yǎng)18～24 h，根據(jù)菌落及染色形態(tài)特點(diǎn)，作出初步判斷。在試管內(nèi)壁與液面交界處輕輕研磨，使細(xì)菌混勻在液體培養(yǎng)基中參考文獻(xiàn)1周庭銀編著，臨床微生物學(xué)診斷與圖解（第二版）.上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,20072葉應(yīng)嫵，王毓三，：東南大學(xué)出版社，2006 江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：穿刺液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號(hào)：穿刺液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的規(guī)范穿刺液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。3. 職責(zé)微生物檢驗(yàn)人員嚴(yán)格執(zhí)行本程序。4. 程序 一級(jí)報(bào)告 陽性報(bào)警血培養(yǎng)瓶應(yīng)進(jìn)行涂片革蘭染色，將涂片結(jié)果電話（或其他方式）通知臨床。培訓(xùn)試劑應(yīng)明顯標(biāo)記“僅供培訓(xùn)使用”，并與檢驗(yàn)試劑分開放置。2． 適用范圍微生物實(shí)驗(yàn)室的所有檢驗(yàn)項(xiàng)目。參見《試劑管理程序》。參見《標(biāo)本接收、標(biāo)識(shí)程序》、《樣本拒收程序》。 ，以增強(qiáng)自身抵 抗力。非一次性的利器放入厚壁容器中并運(yùn)送特定區(qū)域消毒，最好高壓消毒。、蓋片、平皿、試管等用1000g/L含氯消毒劑浸泡消毒液浸泡，經(jīng)煮沸后清洗或丟棄。，如污染了實(shí)驗(yàn)臺(tái)或地面，應(yīng)用3%來蘇兒覆蓋其上半小時(shí)，然后清洗；如污染工作服，應(yīng)立即脫下，高壓滅菌。藥敏紙片：常見葡萄球菌藥敏紙片定為剩支紙片時(shí)預(yù)定下一批；常見腸桿菌科藥敏紙片定剩紙片時(shí)預(yù)定下一批。使用抗血清時(shí)應(yīng)注意效價(jià)、透明度與色澤，如有渾濁或沉淀表示已污染，應(yīng)立即停用。、質(zhì)量控制工作。，如紫外線江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：實(shí)驗(yàn)室安全管理制度文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號(hào)：實(shí)驗(yàn)室安全管理制度【目的】保障個(gè)人安全，防止交叉感染。3. 發(fā)生醫(yī)院感染流行或爆發(fā)時(shí)，承擔(dān)相關(guān)檢測(cè)工作。7. 檢驗(yàn)人員結(jié)束操作后應(yīng)及時(shí)洗手，有必要時(shí)用消毒浸泡。9. 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員應(yīng)定期健康體檢及必要的預(yù)防接種，以增強(qiáng)自身抵抗力。低溫保存的試劑須放置于冰箱內(nèi)。 培養(yǎng)基保存 常規(guī)28℃保存 不常用的培養(yǎng)基應(yīng)用塑料袋包好儲(chǔ)存,避免脫水致某些指示劑或抑制劑濃度相對(duì)增加,而使病原菌不能生長或生長不良。，必要資料和書籍帶入后，應(yīng)遠(yuǎn)離操作臺(tái)。5. 菌種保存范圍及向外單位轉(zhuǎn)移，應(yīng)按國家衛(wèi)生部規(guī)定執(zhí)行。3． 實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本姓名、編號(hào)或者標(biāo)本采集不符合要求時(shí)要退回重留標(biāo)本。6． 培養(yǎng)過的平板、菌株或有感染性標(biāo)本必須滅毒（高壓）后才可廢棄。 記錄和報(bào)告，如標(biāo)本接收、細(xì)菌鑒定流程表、檢驗(yàn)結(jié)果審核等。 如果儀器脫離實(shí)驗(yàn)室未被直接控制，或已被修理、維護(hù)過，該儀器在實(shí)驗(yàn)室重新使用之前，應(yīng)經(jīng)校準(zhǔn)、驗(yàn)證或檢測(cè)表明其達(dá)到規(guī)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)后方可再使用。檢測(cè)結(jié)果須在截止日期前上報(bào)。 分析中質(zhì)量管理 試劑的質(zhì)量控制 所有試劑用于檢測(cè)標(biāo)本前，必須做質(zhì)控以評(píng)估質(zhì)量并記錄質(zhì)控結(jié)果，只有質(zhì)控合格才可使用。符合生長、生化試驗(yàn)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)者方可使用。腦脊液標(biāo)本需涂片檢查。伸入斜面培養(yǎng)管內(nèi)，先從斜面底部到頂端拖一條接種線，再自下而上地蜿蜒劃線，或直接自下而上地蜿蜒劃線。 接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、CO2 培養(yǎng)箱等。 體液均需做厭氧培養(yǎng)，故輸送過程嚴(yán)格厭氧環(huán)境。 直腸拭子未置于運(yùn)送培養(yǎng)基中。
　　 金黃色葡萄球菌培養(yǎng)　參見《葡萄球菌屬檢驗(yàn)操作規(guī)程》。2. 適用范圍呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)和涂片檢查。革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽性細(xì)菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參見試劑說明書。，作出初步判斷，然后按各類細(xì)菌特征進(jìn)行生化鑒定，并同時(shí)作藥物敏感試驗(yàn)。11. 危急值報(bào)告如查出抗酸桿菌陽性，則應(yīng)及時(shí)向臨床報(bào)告并作報(bào)傳染病報(bào)告?！　?涂片檢查
　　 一般細(xì)菌涂片檢查　外觀混濁或膿樣腦脊液可直接涂片，無色、透明的腦脊液，應(yīng)3000r／minl10～15min離心后取沉淀物涂片、革蘭染色、鏡檢。85%腦膿腫患者腦脊液培養(yǎng)可檢出厭氧菌，有時(shí)可為厭氧菌和需氧菌混合感染。 標(biāo)本保存采集標(biāo)本后立即送到實(shí)驗(yàn)室，不能及時(shí)送檢可置冰箱。 尿標(biāo)本采集應(yīng)及時(shí)送檢，2h內(nèi)進(jìn)行接種。10. 臨床意義正常人的腦脊液是無菌的，檢出細(xì)菌提示細(xì)菌性（急性化膿性或結(jié)核性等）腦膜炎。革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽性細(xì)菌藥敏卡(GPS)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參見試劑說明書。醫(yī)院獲得性肺炎的常見病原菌是革蘭陰性桿菌，主要有肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、沙雷菌屬和腸桿菌屬細(xì)菌等。萋尼染色弱陽性則報(bào)告革蘭陽性桿菌疑似諾卡菌。 未用指定的無菌容器留痰作細(xì)菌培養(yǎng)。②真菌性：念珠菌、毛霉菌等。
　　 霍亂弧菌培養(yǎng)　參見《霍亂弧菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》 。培養(yǎng)沙門菌和志賀菌的標(biāo)本應(yīng)放置磷酸鹽甘油溶液中保存。7. 操作流程穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液等）厭氧培養(yǎng)多功能體液培養(yǎng)瓶或血培養(yǎng)瓶離心厭氧血瓊脂平板35℃厭氧環(huán)境培養(yǎng)24～48h有菌生長沉淀物涂片、染色培養(yǎng)2日或5日無細(xì)菌生長可發(fā)出報(bào)告涂片、染色耐氧試驗(yàn)儀器或手工細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)厭氧血平板生長發(fā)出報(bào)告8. 結(jié)果報(bào)告 培養(yǎng)48h無細(xì)菌生長，報(bào)告”培養(yǎng)2日無細(xì)菌生長”。