【正文】 靛基質(zhì)陽性反應(yīng)。以無菌操作移取培養(yǎng)物1ml至13mm*100mm試管中，加5％，40％，振搖試管后靜置2h，如出現(xiàn)伊紅色，為VP試驗(yàn)陽性。1℃的培養(yǎng)96h記錄有無生長。 革蘭氏染色：取18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物作革蘭氏染色。注：本文參照SN016992《出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗(yàn)方法》（六）沙門氏菌檢驗(yàn)1 主題內(nèi)容與適用范圍本文規(guī)定了食品中沙門氏菌的檢驗(yàn)方法。4 檢驗(yàn)程序檢樣25g+225mlBP胨水沙門氏菌檢驗(yàn)程序如下： 　　　 36177。1℃ 1824h挑取可疑菌落TSI（斜面、底層、產(chǎn)氣、H2S），蛋白胨水（），尿素（），KCN, 賴氨酸非如左述的各種反應(yīng)結(jié)果H2S 　靛基質(zhì)尿素　KCN　賴氨酸+/H2S +　靛基質(zhì)+尿素　KCN　賴氨酸+H2S +　靛基質(zhì)尿素　KCN　賴氨酸+ONPG甘露醇、山梨醇非沙門氏菌沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn)沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn)非沙門氏菌報(bào)告5 操作步驟 前增菌取檢樣25g，加入225mL緩沖蛋白胨水于均質(zhì)杯內(nèi)。1℃培養(yǎng)18～24h。1℃分別培養(yǎng)18～24h(DHL)或40～48h(BS)，觀察各個(gè)平板上生長的菌落，沙門氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和沙門氏菌Ⅲ在各個(gè)平板上的菌落特征見表1。 在接種三糖鐵瓊脂的同時(shí)，再接種蛋白陳水(供做靛基質(zhì)試驗(yàn))、尿素瓊脂()、氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基和賴氨酸脫竣酶試驗(yàn)培養(yǎng)基及對(duì)照培養(yǎng)基各1管，于36177。如尿素、KCN和賴氨酸3項(xiàng)中有1項(xiàng)異常，按表4可判定為沙門氏菌。ONPG十為大腸埃希氏菌，ONPG－為沙門氏菌。 菌型的判定和結(jié)果報(bào)告　　綜合以上生化試驗(yàn)和血清學(xué)分型鑒定的結(jié)果，按照GB/《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)》中表8或有關(guān)沙門氏菌屬抗原表判定菌型，并報(bào)告結(jié)果。1℃）、冰箱、均質(zhì)器、振蕩器、平皿、稀釋瓶、天平、顯微鏡、接種棒等3 培養(yǎng)基和試劑普通肉湯培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆肉湯、Baird－Prker瓊脂平板、緩沖蛋白胨水（BP）、凝固酶試驗(yàn)凍干血漿4 檢驗(yàn)程序（非選擇性增菌法）金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)程序如下：檢樣25g+225mlBP胨水10ml勻液+10ml雙料胰胨肉湯上述混合液+20ml20％NaCl單料胰胨肉湯36177。1℃ 24h涂片染色凝固酶試驗(yàn)觀察溶血報(bào)告5 操作步驟 稱取25g固體樣品；吸取25mL液體樣品，加入225mLBP胨水，固體樣品研磨或置均質(zhì)器中制成混懸液。1℃培養(yǎng)24177。2h。1℃培養(yǎng)，定時(shí)觀察是否有凝塊形成，至少觀察6h，以內(nèi)容物完全凝固，使試管倒置或傾斜時(shí)不流動(dòng)為陽性。在Baird－Parker平板上為圓形、光滑凸起、濕潤、直徑為2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。本文適用于航空食品和飲料中霉菌計(jì)數(shù)的檢驗(yàn)。 取1mL1∶10稀釋液注入含有9mL滅菌水的試管中，另換一支1mL滅菌吸管吹吸5次，此液為1∶100稀釋液。注：本文參照GB/《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)》（九）革蘭氏染色1 原理革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中重要的鑒別染色法，通過此法染色，可將細(xì)菌鑒別為革蘭氏陽性菌和陰性菌兩大類。 固定：把涂有細(xì)菌的面朝上，在酒精燈火焰上通過三次，目的是殺死菌體細(xì)胞以及改變對(duì)染色劑的通透性，同時(shí)使涂片的菌體緊貼載玻片而不易被水沖洗脫落。 復(fù)染：用蕃紅花紅液復(fù)染1~2分種，水洗晾干或用吸水紙吸干。染色控制不好，易引起誤判； 乙醇脫色的程度。3 器材培養(yǎng)皿、生化培養(yǎng)箱、營養(yǎng)瓊脂4 方法（沉降法） 以無菌操作將已融化并冷卻至50℃的營養(yǎng)瓊脂倒入培養(yǎng)皿中，放置凝固。)9cmt：為平皿暴露于空氣中的時(shí)間(t=15分鐘)（這個(gè)公式根據(jù)：根據(jù)15分鐘內(nèi)在100 cm2面積上降落的細(xì)菌數(shù)約等于10升空氣中的含菌數(shù)而估計(jì)的。水中總大腸菌群數(shù)系以100ml水樣中污染的總大腸菌群最可能數(shù)（MPN）表示。 細(xì)菌總數(shù)檢查： 用滅菌吸管吸取1ml水樣，注入滅菌培養(yǎng)皿中，共做2個(gè)。將上述各發(fā)酵管（瓶）置36177。 分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管用接種環(huán)分別以劃線法轉(zhuǎn)接于伊紅美蘭瓊脂平板上，置36177。2小時(shí)進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，觀察產(chǎn)氣情況。2 檢驗(yàn)材料　乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基、EMB、乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基、大腸菌群檢測(cè)紙片、無菌棉球、無菌水、酒精棉球、酒精燈、鑷子　3 檢驗(yàn)方法 人員手檢驗(yàn)（發(fā)酵法） 樣品采集被檢人雙手五指并攏，用一浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10ml滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)。1℃培養(yǎng)24小時(shí)。 證實(shí)試驗(yàn)：在每個(gè)平板上，挑取可疑菌落(紫黑色或淡紫紅色，有或略有或沒有金屬光澤的菌落)1~2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置36177。 設(shè)備、器具等的檢驗(yàn)（紙片法） 將面積為25cm2的大腸菌群檢測(cè)紙片用無菌水浸濕后立即貼于被檢物表面，每份檢樣貼2張，30s后取下，置于無菌塑料袋中?！∽ⅲ罕疚膮⒄誈B159792002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》附錄EGB14934—94《食(飲)具消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（十三）蔬菜農(nóng)殘的快速檢測(cè)1 原理農(nóng)殘速測(cè)卡是用對(duì)農(nóng)藥高度敏感的膽堿酯酶和顯色劑做成的酶試紙，可以快速檢測(cè)蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯這兩類用量較大、毒性較高的殺蟲劑的殘留情況，選用的酶對(duì)甲胺磷敏感，抗干擾性強(qiáng)，操作簡便。預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。 取一片速測(cè)卡，將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。 每批測(cè)定應(yīng)設(shè)一個(gè)純凈水或緩沖液的空白對(duì)照卡。5 附加說明 蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、皎白、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。注意樣品放置的時(shí)間應(yīng)與空白對(duì)照卡放置的時(shí)間一致才有可比性。修訂　1　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 2006－09－01。 速測(cè)卡對(duì)農(nóng)藥非常敏感，測(cè)定時(shí)如果附近噴灑農(nóng)藥或使用衛(wèi)生殺蟲劑，以及操作者和器皿沾有微量農(nóng)藥，都會(huì)造成對(duì)照和測(cè)定藥片不變藍(lán)。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。白色藥片變?yōu)樘焖{(lán)色或與空白對(duì)照卡相同，為陰性結(jié)果。預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。 每批測(cè)定應(yīng)設(shè)一個(gè)純凈水或緩沖液的空白對(duì)照卡。農(nóng)殘速測(cè)卡對(duì)幾種常用農(nóng)藥的最低檢測(cè)限（單位：mg/kg）如下： 2 檢驗(yàn)材料　農(nóng)殘速測(cè)卡　3 使用方法 整體測(cè)定法 選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取5g放入帶蓋瓶中，加入10ml純凈水或緩沖溶液，振搖50次，靜置2min以上。 若紙片保持藍(lán)紫色不變?yōu)榇竽c菌群陰性，紙片變黃并在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)或片狀紅暈為陽性。2小時(shí)進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，觀察產(chǎn)氣情況。 分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管用接種環(huán)分別以劃線法轉(zhuǎn)接于伊紅美蘭瓊脂平板上，置36177。1℃培養(yǎng)48小時(shí)，計(jì)數(shù)平板上細(xì)菌菌落數(shù)。4 報(bào)告每毫升自來水所含菌落數(shù)以個(gè)/mL表示；根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù)，查大腸菌群檢索表，報(bào)告每升水樣的大腸菌群的最可能數(shù)。 證實(shí)試驗(yàn)：在每個(gè)平板上，挑取可疑菌落(紫黑色或淡紫紅色，有或略有或沒有金屬光澤的菌落)1~2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置36177。2小時(shí)，觀察結(jié)果。兩個(gè)培養(yǎng)皿的平均菌落數(shù)即為水樣1ml中的細(xì)菌總數(shù)。2 材料營養(yǎng)瓊脂、乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基、酒精、棉簽、培養(yǎng)皿、無菌廣口瓶3 方法 采樣（自來水）：先將水龍頭打開，放水1~2分鐘后，關(guān)閉水龍頭?？偞竽c菌群系指一群在37℃培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。 將培養(yǎng)皿放置37℃恒溫培養(yǎng)48小時(shí)，取出觀察其結(jié)果并計(jì)算出菌落數(shù)。（十）空氣中微生物的檢驗(yàn)1 目的了解空氣中微生物的狀況，掌握空氣中微生物的檢驗(yàn)方法，分析引起食品中微生物的來源因素，及時(shí)控制餐食衛(wèi)生質(zhì)量。5 革蘭氏染色成敗的控制點(diǎn) 涂片厚度：涂片過厚，細(xì)胞重疊，無法較好地觀察單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞形態(tài)，涂片過薄，細(xì)胞數(shù)量少，不利于觀察； 染色時(shí)間。 媒染：加一滴路哥爾氏碘液媒染1分鐘、水洗。若細(xì)胞能保持結(jié)晶紫與碘所形成的復(fù)合物而不被乙醇脫色，則細(xì)菌呈紫色，稱革蘭氏陽性菌，若被乙醇脫色而被蕃紅復(fù)染成紅色，則稱革蘭氏陰性菌，2 藥品與材料革蘭氏染色液（草酸銨結(jié)晶紫液＋路哥爾氏碘液＋95%乙醇＋蕃紅花紅）、蒸餾水