【正文】 靛基質(zhì)陽性反應(yīng)。以無菌操作移取培養(yǎng)物1ml至13mm*100mm試管中，加5％，40％，振搖試管后靜置2h，如出現(xiàn)伊紅色，為VP試驗陽性。1℃的培養(yǎng)96h記錄有無生長。 革蘭氏染色：取18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物作革蘭氏染色。注：本文參照SN016992《出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法》（六）沙門氏菌檢驗1 主題內(nèi)容與適用范圍本文規(guī)定了食品中沙門氏菌的檢驗方法。4 檢驗程序檢樣25g+225mlBP胨水沙門氏菌檢驗程序如下： 　　　 36177。1℃ 1824h挑取可疑菌落TSI（斜面、底層、產(chǎn)氣、H2S），蛋白胨水（），尿素（），KCN, 賴氨酸非如左述的各種反應(yīng)結(jié)果H2S 　靛基質(zhì)尿素　KCN　賴氨酸+/H2S +　靛基質(zhì)+尿素　KCN　賴氨酸+H2S +　靛基質(zhì)尿素　KCN　賴氨酸+ONPG甘露醇、山梨醇非沙門氏菌沙門氏菌血清學試驗沙門氏菌血清學試驗非沙門氏菌報告5 操作步驟 前增菌取檢樣25g，加入225mL緩沖蛋白胨水于均質(zhì)杯內(nèi)。1℃培養(yǎng)18～24h。1℃分別培養(yǎng)18～24h(DHL)或40～48h(BS)，觀察各個平板上生長的菌落，沙門氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和沙門氏菌Ⅲ在各個平板上的菌落特征見表1。 在接種三糖鐵瓊脂的同時，再接種蛋白陳水(供做靛基質(zhì)試驗)、尿素瓊脂()、氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基和賴氨酸脫竣酶試驗培養(yǎng)基及對照培養(yǎng)基各1管，于36177。如尿素、KCN和賴氨酸3項中有1項異常，按表4可判定為沙門氏菌。ONPG十為大腸埃希氏菌，ONPG－為沙門氏菌。 菌型的判定和結(jié)果報告　　綜合以上生化試驗和血清學分型鑒定的結(jié)果，按照GB/《食品衛(wèi)生微生物學檢驗沙門氏菌檢驗》中表8或有關(guān)沙門氏菌屬抗原表判定菌型，并報告結(jié)果。1℃）、冰箱、均質(zhì)器、振蕩器、平皿、稀釋瓶、天平、顯微鏡、接種棒等3 培養(yǎng)基和試劑普通肉湯培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆肉湯、Baird－Prker瓊脂平板、緩沖蛋白胨水（BP）、凝固酶試驗凍干血漿4 檢驗程序（非選擇性增菌法）金黃色葡萄球菌檢驗程序如下：檢樣25g+225mlBP胨水10ml勻液+10ml雙料胰胨肉湯上述混合液+20ml20％NaCl單料胰胨肉湯36177。1℃ 24h涂片染色凝固酶試驗觀察溶血報告5 操作步驟 稱取25g固體樣品；吸取25mL液體樣品，加入225mLBP胨水，固體樣品研磨或置均質(zhì)器中制成混懸液。1℃培養(yǎng)24177。2h。1℃培養(yǎng)，定時觀察是否有凝塊形成，至少觀察6h，以內(nèi)容物完全凝固，使試管倒置或傾斜時不流動為陽性。在Baird－Parker平板上為圓形、光滑凸起、濕潤、直徑為2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。本文適用于航空食品和飲料中霉菌計數(shù)的檢驗。 取1mL1∶10稀釋液注入含有9mL滅菌水的試管中，另換一支1mL滅菌吸管吹吸5次，此液為1∶100稀釋液。注：本文參照GB/《食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數(shù)》（九）革蘭氏染色1 原理革蘭氏染色法是細菌學中重要的鑒別染色法，通過此法染色，可將細菌鑒別為革蘭氏陽性菌和陰性菌兩大類。 固定：把涂有細菌的面朝上，在酒精燈火焰上通過三次，目的是殺死菌體細胞以及改變對染色劑的通透性，同時使涂片的菌體緊貼載玻片而不易被水沖洗脫落。 復染：用蕃紅花紅液復染1~2分種，水洗晾干或用吸水紙吸干。染色控制不好，易引起誤判； 乙醇脫色的程度。3 器材培養(yǎng)皿、生化培養(yǎng)箱、營養(yǎng)瓊脂4 方法（沉降法） 以無菌操作將已融化并冷卻至50℃的營養(yǎng)瓊脂倒入培養(yǎng)皿中，放置凝固。)9cmt：為平皿暴露于空氣中的時間(t=15分鐘)（這個公式根據(jù)：根據(jù)15分鐘內(nèi)在100 cm2面積上降落的細菌數(shù)約等于10升空氣中的含菌數(shù)而估計的。水中總大腸菌群數(shù)系以100ml水樣中污染的總大腸菌群最可能數(shù)（MPN）表示。 細菌總數(shù)檢查： 用滅菌吸管吸取1ml水樣，注入滅菌培養(yǎng)皿中，共做2個。將上述各發(fā)酵管（瓶）置36177。 分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管用接種環(huán)分別以劃線法轉(zhuǎn)接于伊紅美蘭瓊脂平板上，置36177。2小時進行復發(fā)酵試驗，觀察產(chǎn)氣情況。2 檢驗材料　乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基、EMB、乳糖復發(fā)酵培養(yǎng)基、大腸菌群檢測紙片、無菌棉球、無菌水、酒精棉球、酒精燈、鑷子　3 檢驗方法 人員手檢驗（發(fā)酵法） 樣品采集被檢人雙手五指并攏，用一浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10ml滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)。1℃培養(yǎng)24小時。 證實試驗：在每個平板上，挑取可疑菌落(紫黑色或淡紫紅色，有或略有或沒有金屬光澤的菌落)1~2個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置36177。 設(shè)備、器具等的檢驗（紙片法） 將面積為25cm2的大腸菌群檢測紙片用無菌水浸濕后立即貼于被檢物表面，每份檢樣貼2張，30s后取下，置于無菌塑料袋中?！∽ⅲ罕疚膮⒄誈B159792002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》附錄EGB14934—94《食(飲)具消毒衛(wèi)生標準》（十三）蔬菜農(nóng)殘的快速檢測1 原理農(nóng)殘速測卡是用對農(nóng)藥高度敏感的膽堿酯酶和顯色劑做成的酶試紙，可以快速檢測蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯這兩類用量較大、毒性較高的殺蟲劑的殘留情況，選用的酶對甲胺磷敏感，抗干擾性強，操作簡便。預反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。 取一片速測卡，將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。 每批測定應(yīng)設(shè)一個純凈水或緩沖液的空白對照卡。5 附加說明 蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、皎白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。注意樣品放置的時間應(yīng)與空白對照卡放置的時間一致才有可比性。修訂　1　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 2006－09－01。 速測卡對農(nóng)藥非常敏感，測定時如果附近噴灑農(nóng)藥或使用衛(wèi)生殺蟲劑，以及操作者和器皿沾有微量農(nóng)藥，都會造成對照和測定藥片不變藍。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。白色藥片變?yōu)樘焖{色或與空白對照卡相同，為陰性結(jié)果。預反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。 每批測定應(yīng)設(shè)一個純凈水或緩沖液的空白對照卡。農(nóng)殘速測卡對幾種常用農(nóng)藥的最低檢測限（單位：mg/kg）如下： 2 檢驗材料　農(nóng)殘速測卡　3 使用方法 整體測定法 選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取5g放入帶蓋瓶中，加入10ml純凈水或緩沖溶液，振搖50次，靜置2min以上。 若紙片保持藍紫色不變?yōu)榇竽c菌群陰性，紙片變黃并在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點或片狀紅暈為陽性。2小時進行復發(fā)酵試驗，觀察產(chǎn)氣情況。 分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管用接種環(huán)分別以劃線法轉(zhuǎn)接于伊紅美蘭瓊脂平板上，置36177。1℃培養(yǎng)48小時，計數(shù)平板上細菌菌落數(shù)。4 報告每毫升自來水所含菌落數(shù)以個/mL表示；根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù)，查大腸菌群檢索表，報告每升水樣的大腸菌群的最可能數(shù)。 證實試驗：在每個平板上，挑取可疑菌落(紫黑色或淡紫紅色，有或略有或沒有金屬光澤的菌落)1~2個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置36177。2小時，觀察結(jié)果。兩個培養(yǎng)皿的平均菌落數(shù)即為水樣1ml中的細菌總數(shù)。2 材料營養(yǎng)瓊脂、乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基、酒精、棉簽、培養(yǎng)皿、無菌廣口瓶3 方法 采樣（自來水）：先將水龍頭打開，放水1~2分鐘后，關(guān)閉水龍頭?？偞竽c菌群系指一群在37℃培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。 將培養(yǎng)皿放置37℃恒溫培養(yǎng)48小時，取出觀察其結(jié)果并計算出菌落數(shù)。（十）空氣中微生物的檢驗1 目的了解空氣中微生物的狀況，掌握空氣中微生物的檢驗方法，分析引起食品中微生物的來源因素，及時控制餐食衛(wèi)生質(zhì)量。5 革蘭氏染色成敗的控制點 涂片厚度：涂片過厚，細胞重疊，無法較好地觀察單個細菌細胞形態(tài)，涂片過薄，細胞數(shù)量少，不利于觀察； 染色時間。 媒染：加一滴路哥爾氏碘液媒染1分鐘、水洗。若細胞能保持結(jié)晶紫與碘所形成的復合物而不被乙醇脫色，則細菌呈紫色，稱革蘭氏陽性菌，若被乙醇脫色而被蕃紅復染成紅色，則稱革蘭氏陰性菌，2 藥品與材料革蘭氏染色液（草酸銨結(jié)晶紫液＋路哥爾氏碘液＋95%乙醇＋蕃紅花紅）、蒸餾水