【正文】 門(mén)的開(kāi)關(guān)是否靈活，橡皮圈有無(wú)損壞，是否平整。 裝放 大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品不應(yīng)超過(guò)鍋內(nèi)容積的80%，物品應(yīng)放置鍋內(nèi)擱架上或鐵絲筐中。 滅菌前準(zhǔn)備 所有需經(jīng)滅菌的物品首先要清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴(yán)密，如用金屬筒應(yīng)將上面氣孔打開(kāi)。 在無(wú)菌間需用安裝空調(diào)時(shí)，則應(yīng)有過(guò)濾裝置。 無(wú)菌間使用前后應(yīng)將門(mén)關(guān)緊，打開(kāi)紫外燈，如采用室內(nèi)懸掉紫外燈消毒時(shí)，需30W紫外燈，距離工作臺(tái)1m處，照射時(shí)間不少于30分鐘，使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線(xiàn)下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精球輕輕擦拭，除去上面的灰塵和油垢，以減少紫外線(xiàn)穿透的影響。2 無(wú)菌間使用要求 無(wú)菌間應(yīng)密封，不得隨意打開(kāi)，并設(shè)有與無(wú)菌間大小相應(yīng)的緩沖間及門(mén)，另盡量設(shè)有的小窗，以備進(jìn)入無(wú)菌間后傳遞物品。（三）基本技術(shù)要求1 無(wú)菌操作要求微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員，必須有嚴(yán)格的無(wú)菌觀念，許多實(shí)驗(yàn)要求在無(wú)菌的條件下進(jìn)行，主要原因，一是防止試驗(yàn)操作中人為污染樣品，二是保證工作人員安全，防止檢出的致病菌由于操作不當(dāng)造成個(gè)人污染。樣品檢驗(yàn)過(guò)程中所用方法、出現(xiàn)的現(xiàn)象和結(jié)果等均要用文字寫(xiě)出試驗(yàn)記錄，以作為對(duì)結(jié)果分析、判定的依據(jù)，記錄要求詳細(xì)、清楚、真實(shí)、客觀、不得涂改和偽造。清洗過(guò)的器皿不應(yīng)殘留洗滌劑的痕跡。 制備試劑和培養(yǎng)基所用的水，應(yīng)為無(wú)離子水或用玻璃器皿蒸餾的蒸餾水。 檢驗(yàn)所使用的稀釋液、試劑、培養(yǎng)基接觸的一切器皿必須經(jīng)過(guò)有效的滅菌。 固體或半固體樣品可用滅菌的均質(zhì)杯稱(chēng)取一定量，再加適量的稀釋液或培養(yǎng)基進(jìn)行均質(zhì)，從樣品的均質(zhì)到稀釋和接種，相隔時(shí)間不應(yīng)超過(guò)15分鐘。 非粘性液體樣品可用吸管吸取一定量，然后加入適量的稀釋液或培養(yǎng)基內(nèi)，,也不得將吸有樣品的吸管浸入稀釋液或培養(yǎng)基內(nèi)。從混樣到檢驗(yàn)間隔時(shí)間不應(yīng)超過(guò)3分鐘。 檢驗(yàn)液體或半固體樣品前應(yīng)先將其充分搖勻。 檢驗(yàn)冷凍樣品前應(yīng)先使其融化。 待檢樣品存放時(shí)間一般不應(yīng)超過(guò)36小時(shí)。 運(yùn)送冷凍和易腐食品應(yīng)在包裝容器內(nèi)加適量的冷卻劑或冷凍劑。 樣品的保存和運(yùn)送 樣品采集完后，應(yīng)迅速送往實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，送檢過(guò)程中一般不超過(guò)3h，如路程較遠(yuǎn)，可保存在1－5℃環(huán)境中，如需冷凍者，則在冷凍狀態(tài)下送檢。 在將冷凍食品送到實(shí)驗(yàn)室前，要始終保持樣品處于冷凍狀態(tài)。 如為非冷藏易腐食品，應(yīng)迅速將所采樣品冷卻至0－4℃。 采樣方法 采取隨機(jī)抽樣的方式。樣品應(yīng)一式三份，分別供檢驗(yàn)、復(fù)檢及備查使用，每份樣品數(shù)量一般不少于200g。 采樣必須遵循無(wú)菌操作程，容器必須滅菌，避免環(huán)境中微生物污染，容器不得使用煤酚皂溶液，新潔爾滅、酒精等消毒物滅菌，更不能含有此類(lèi)消毒藥物，以避免殺掉樣品中的微生物，所用剪、刀、匙用具也需滅菌方可使用。 采樣原則 采集的樣品要有代表性，采樣時(shí)應(yīng)首先對(duì)該批食品原料、加工、運(yùn)輸、貯藏方法條件、周?chē)h(huán)境衛(wèi)生狀況等進(jìn)行詳細(xì)調(diào)查，檢查是否有污染源存在，同時(shí)能反映全部被檢食品的組成、質(zhì)量和衛(wèi)生狀況。本文適用于食品中微生物學(xué)檢驗(yàn)的采樣、檢驗(yàn)及結(jié)果報(bào)告。下班前關(guān)好門(mén)窗，方可離去。5 實(shí)驗(yàn)完畢，及時(shí)清理現(xiàn)場(chǎng)和實(shí)驗(yàn)用具，對(duì)染菌帶毒物品，進(jìn)行消毒滅菌處理，并填寫(xiě)日常工作記錄。3 嚴(yán)禁用口直接吸取藥品和菌液，按無(wú)菌操作進(jìn)行，如發(fā)生菌液、病原體濺出容器外時(shí)，應(yīng)立即用有效消毒劑進(jìn)行徹底消毒，安全處理后方能離開(kāi)現(xiàn)場(chǎng)。34微生物實(shí)驗(yàn)室操作指導(dǎo)書(shū)（受控）微生物實(shí)驗(yàn)室操作指導(dǎo)書(shū)目錄（一）安全守則（二）檢驗(yàn)總則（三）基本技術(shù)要求（四）食品平板菌落計(jì)數(shù)（五）食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗(yàn)方法（六）沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)（七）金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)（八）霉菌計(jì)數(shù)（九）革蘭氏染色（十）空氣中微生物的檢驗(yàn)（十一） 水中微生物的檢驗(yàn)（十二）食品接觸面的微生物檢驗(yàn)（十三）蔬菜農(nóng)殘的快速檢測(cè)審核：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　編制： （一）安全守則1 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作衣、帽、鞋必須穿戴整齊。2 在進(jìn)行高壓、干燥、消毒等工作時(shí)，工作人員不得擅自離開(kāi)現(xiàn)場(chǎng)，認(rèn)真觀察溫度、時(shí)間，蒸餾易揮發(fā)、易燃液體時(shí)，不準(zhǔn)直接加熱，應(yīng)置水浴鍋上進(jìn)行。4 工作完畢，兩手用清水肥皂洗凈，必要時(shí)可用（殺菌劑）新潔爾滅、過(guò)氧乙酸液浸泡手，然后用水沖洗，工作服應(yīng)經(jīng)常清洗，保持整潔，必要時(shí)高壓消毒。6 每日下班，認(rèn)真檢查水、相關(guān)電源是否關(guān)閉和正在使用的設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)是否正常，并認(rèn)真記錄。（二）檢驗(yàn)總則1 主題內(nèi)容與適用范圍　本文規(guī)定了微生物檢驗(yàn)一般規(guī)則。2 樣品的采集 采樣目的確保采集的樣品能代表全部被檢驗(yàn)的物質(zhì)，使檢驗(yàn)分析更具代表性。 應(yīng)設(shè)法保持樣品原有微生物狀況，在進(jìn)行檢驗(yàn)前不得污染，不發(fā)生變化。 采樣數(shù)量取樣數(shù)量的確定，應(yīng)考慮分析項(xiàng)目的要求、分析方法的要求及被檢物的均勻程度三個(gè)因素。根據(jù)不同種類(lèi)采樣數(shù)量略有不同，實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)樣品一般為25克。 直接食用的小包裝食品，盡可能取原包裝，直到檢驗(yàn)前不要開(kāi)封，以防污染。 不要使樣品過(guò)度潮濕，以防食品中固有的細(xì)菌增殖。樣品一旦融化，不可使其再凍，保持冷卻即可。 冷凍樣品應(yīng)存放在－15℃以下冰箱內(nèi)；冷卻和易腐食品應(yīng)存放在0－5℃冰箱或冷卻庫(kù)內(nèi)；其它食品可放在常溫冷暗處。保證途中樣品不升溫或不融化。3 檢驗(yàn)樣品的制備 樣品的全部制備過(guò)程均應(yīng)遵循無(wú)菌操作程序?？稍?－4℃融化，時(shí)間不超過(guò)18小時(shí)，也可在溫度不超過(guò)45℃的環(huán)境中融化，時(shí)間不超過(guò)15分鐘。如容器已裝滿(mǎn)，可迅速翻轉(zhuǎn)25次；如未裝滿(mǎn)，可于7s內(nèi)以30cm的幅度搖動(dòng)25次。 開(kāi)啟樣品包裝前，先將表面擦干凈，然后用75％乙醇消毒開(kāi)啟部位及其周?chē)? 粘性液體樣品可用滅菌容器稱(chēng)取一定量，然后加入適量的稀釋液或培養(yǎng)基。4 檢驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)室收到樣品后，首先進(jìn)行外觀檢驗(yàn)，及時(shí)按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)過(guò)程中要認(rèn)真、負(fù)責(zé)，嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，避免環(huán)境中微生物污染。 實(shí)驗(yàn)室所用儀器、設(shè)備的性能應(yīng)定期檢查和校正。 檢驗(yàn)結(jié)束后，所有帶菌的培養(yǎng)基、試劑、稀釋液和器皿必須盡快滅菌和洗刷。5 檢驗(yàn)記錄和結(jié)果的報(bào)告 經(jīng)檢驗(yàn)的每份樣品都應(yīng)有完整的檢驗(yàn)記錄。 檢驗(yàn)結(jié)束后，根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果，及時(shí)填寫(xiě)檢驗(yàn)報(bào)告書(shū)，簽字并經(jīng)負(fù)責(zé)人審核簽字后發(fā)出。要求如下： 接種細(xì)菌時(shí)必須穿工作服、帶工作帽； 進(jìn)行接種食品樣品時(shí)，必須穿專(zhuān)用的工作服、帽及拖鞋，應(yīng)放在無(wú)菌室緩沖間，工作前經(jīng)紫外線(xiàn)消毒后使用； 接種食品樣品時(shí)，應(yīng)在進(jìn)無(wú)菌室前用肥皂洗手，然后用酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簦? 進(jìn)行接種所用的吸管、平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌，打開(kāi)包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用酒精點(diǎn)燃燒灼三次后使用； 從包裝中取出吸管時(shí)，吸管尖部不能觸及試管或平皿邊； 接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作，接種細(xì)菌活樣品時(shí)，吸管從包裝中取出后及打開(kāi)試管塞都要通過(guò)火焰消毒； 接種環(huán)和針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，必要時(shí)還要燒到針和環(huán)與桿的連接處，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在沸水中煮沸5min,再經(jīng)火焰燒灼； 吸管吸取菌液或樣品時(shí)，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。 無(wú)菌間應(yīng)保持清潔，工作后用煤酚皂液溶液消毒，擦拭工作臺(tái)面，不得存放與試驗(yàn)無(wú)關(guān)的物品。 處理和接種食品標(biāo)本時(shí)，進(jìn)入無(wú)菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過(guò)小窗傳遞。3 消毒滅菌要求微生物檢測(cè)用的玻璃器皿、金屬用具及培養(yǎng)基、被污染和接種的培養(yǎng)物等，必須經(jīng)滅菌后方能使用。 裝培養(yǎng)基的三角瓶塞好棉塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。 手提式高壓鍋：將物品分別包扎好，直接放入消毒筒內(nèi)，物品之間不能過(guò)擠。 壓力表蒸氣排盡時(shí)是否停留在零位，關(guān)好門(mén)和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察是否漏氣，壓力表與溫度計(jì)所標(biāo)示的狀況是否吻合，管道有無(wú)堵塞。 滅菌處理手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應(yīng)按下列步驟進(jìn)行： 手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水，立式高壓鍋加水16L（重復(fù)使用時(shí)應(yīng)將水量補(bǔ)足，水變混濁需要更換）。 蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開(kāi)頂蓋上的排氣閥放出冷氣（水沸騰后排氣10～15min）。 達(dá)到規(guī)定時(shí)間后，對(duì)需干燥的物品，立即打開(kāi)排氣閥排出蒸汽，待壓力恢復(fù)到零時(shí)，自然冷卻至60℃后開(kāi)蓋取物，如為液體物品，不要打開(kāi)排氣閥，而應(yīng)立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復(fù)至零，溫度降到60℃以下再打開(kāi)蓋取物，以防止突然減壓液體劇烈沸騰活容器爆破。 物品取出，隨即檢查包裝的完整性，若有破壞或棉塞脫掉，不可作為無(wú)菌物品使用。 培養(yǎng)基或試劑等，應(yīng)檢查是否符合達(dá)到滅菌后的色澤或狀態(tài)，未達(dá)到者應(yīng)廢棄。