[理學(xué)]第九章核酸代謝-資料下載頁
2025-03-22 06:40本頁面
【正文】 酸殘基被甲基化修飾 ， 多數(shù)在核糖 2’OH上； RNaseⅢ 及其它核酸內(nèi)切酶裁切 。 (2) tRNA前體的加工 P320 ? 核酸內(nèi)切酶切斷 tRNA前體的兩端； ? 核酸外切酶從端部逐個(gè)切去附加的順序 ， 進(jìn)行修剪； ? 3’端加上 CCAOH(有一類 tRNA本身就有 ， 切去附加序列則露出 )； ? 核苷的修飾 (甲基化 、 脫氨基和還原作用等 ) 。 (3) mRNA前體的加工 ? 原核 :mRNA大多不需加工 ， 一經(jīng)轉(zhuǎn)錄即可直接進(jìn)行翻譯 ,但也有少數(shù)多順反子 mRNA須通過核酸內(nèi)切酶切成較小的單位 ， 然后再進(jìn)行翻譯 。 ? 真核： 5’ 端 形 成 特 殊 的 帽 子 結(jié) 構(gòu)(m7G5’PPP5’NpNp)； 3’端切斷并加上 polyA尾巴； mRNA前體剪接除去內(nèi)含子 ， 連接外顯子；有時(shí)鏈內(nèi)部核苷被甲基化 。 P322 磷酸酶 鳥苷酸轉(zhuǎn)移酶 甲基轉(zhuǎn)移酶 5’端加帽 DNA hnRNA RNA的合成 (RNA復(fù)制 )P324 ? 噬菌體 Qβ 的復(fù)制：以 Qβ 病毒的 RNA(正鏈 )為模板，在 Qβ 復(fù)制酶指導(dǎo)下合成互補(bǔ)鏈(負(fù)鏈 )，再以負(fù)鏈為模板合成正鏈。 ? 病毒 RNA復(fù)制的主要方式：以病毒的 RNA為模板進(jìn)行復(fù)制 (Qβ 病毒 )；以病毒的 RNA為模板，反向轉(zhuǎn)錄成 DNA，再以 DNA為模板，轉(zhuǎn)錄成病毒 RNA(勞氏肉瘤病毒 )。 5 ? RNA 5 ? 3 ? 3 ? RNA+ 釋放 釋放 3? 5 ? 3 ? 3 ? 5 ? 5 ? RNA+ RNA+ RNA ?RNA及 RNA+的合成方向均為 5‘ 3’ 四、基因工程簡介 P325 亦稱遺傳工程，即利用 DNA重組技術(shù)的方法，把 DNA作為組件，在細(xì)胞外將一種外源 DNA(目的基因 )和載體 DNA重新組合連接 (重組 )，最后將重組體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，使外源基因 DNA在宿主細(xì)胞中，隨細(xì)胞的繁殖而增殖 (cloning，克隆 )，或最后得到表達(dá)，最終獲得基因表達(dá)產(chǎn)物或改變生物原有的遺傳性狀。 的操作技術(shù) (1)體外基因重組 ? 目的基因的制備 PCR ? 載體的構(gòu)建：質(zhì)?；蚴删w ? 目的基因與載體重組 (2)重組體 DNA的轉(zhuǎn)化增殖和表達(dá) ? 轉(zhuǎn)化 ? 篩選 ? 增殖和基因表達(dá) Foreign DNA to be inserted Plansmid vector Joining Rebinant DNA molecule Introduction into host cells by transformation of viral infection Host chromateme Slection for cells coteining a rebinant DNA molecule Cloning + 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (Polymerase chain reaction, PCR) ? PCR：在體外中通過酶促反應(yīng)有選擇地大量擴(kuò)增（包括分離）一段目的基因的技術(shù)。 ? 原理：以待擴(kuò)增的兩條 DNA鏈為模板，一對寡核苷酸為引物，通過 DNA聚合酶酶促反應(yīng)，快速體外擴(kuò)增特異 DNA的技術(shù)。 ? PCR反應(yīng)體系的組分： DNA模板、寡核苷酸引物、 dNTP、 DNA聚合酶、 Mg2+ PCR技術(shù)每輪循環(huán)包括： ?變性：雙鏈 DNA解鏈成為單鏈 DNA ?退火 ： 部分引物與模板的單鏈 DNA的特定互補(bǔ)部位相配對和結(jié)合 ?延伸 ： 以目的基因?yàn)槟０?,合成互補(bǔ)的新 DNA鏈 ?每一輪聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可使目的基因片段增加一倍 ?30輪循環(huán)可獲得 230個(gè)片段 ?變性、退火、延伸三步曲 ? PCR技術(shù)的發(fā)明 ? PCR的發(fā)明是 DNA操作技術(shù)的革命 ? 美國 Mullis教授 開汽車時(shí)的聯(lián)想 逶迤崎嶇的山路 ——DNA雙螺旋 行駛的汽車 ——一小段 DNA引物 …… 1988年發(fā)明了 PCR技術(shù) 1993年獲得諾貝爾獎
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