層析分離純化技術(shù)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-01-21 19:26本頁(yè)面
【正文】 2 . 5 5 .0 7 . 5 10 .0 12 .5 liters AU (2 mm) cond. A 280 High S 的初純 High Q的精純 工藝路線選擇 2 0 0 1 1 6 9 7 6 6 5 5 3 6 3 1 2 2 1 4 6 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 k D a Lane Sample 1 MW Standard 2 Bioreactor sup (reduced) 3 Buffer exchanged material (reduced) 4 Partially purified IgM from cation step (reduced) 5 Highly purified IgM from anion step (reduced) 6 MW Standard 7 Bioreactor sup (non reduced) 8 Buffer exchanged material (non reduced) 9 Partially purified IgM from cation step (nonreduced) 10 Highly purified IgM from anion step (nonreduced) IEX——IEX MacroPrep High Q和 High S兩步純化 IgM 工藝路線選擇 IEX——CHT UNOsphere S和 CHT羥基磷灰石兩步純化鼠 mAb IgG 工藝路線選擇 0 .05 0. 01 00 . 0% B u ff e r B12341 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 310 .0 00 .2 50 .5 00 .7 51 .0 01 .2 50 .02 .55 .07 .51 0. 01 2. 50 0: 0 0: 00 0 0: 1 0: 00 0 0: 2 0: 00 0 0: 3 0: 00F ra c ti on sH r: M in :S e c pHAUUNOsphere S初純 0 .05 0. 01 00 . 0% B u ff e r B1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 0. 0 500 .0 0 00 .0 5 00 .1 0 00 .1 5 00 .2 0 00 .2 5 00 .3 0 00 .3 5 00 .4 0 0 10 . 00 .01 0. 02 0. 03 0. 04 0. 05 0. 06 0. 07 0. 08 0. 09 0. 01 00 . 00 0: 0 0: 00 0 0: 1 0: 00 0 0: 2 0: 00 0 0: 3 0: 00 0 0: 4 0: 00 0 0: 5 0: 00F ra c ti on sH r: M in :S e c m S/ c mAUCM UNOsphere PA CHT CHT IEX——CHT UNOsphere S和 CHT羥基磷灰石兩步純化鼠 mAb IgG 工藝路線選擇 CHT精純 Affinity——IEX——CHT 純化 mAb 工藝路線選擇 ? 原理 ? Protein A to remove the bulk of HCP, DNA, endotoxin, virus. ? UNOsphere Q to remove retrovirus, polish DNA, endotoxin, and HCP. ? CHT to remove leached protein A and IgG aggregates, polish other contaminants. Affinity——IEX——CHT 純化 mAb 工藝路線選擇 Protein A CHT UNOsphere Q 4 1 2 3 1 2 3 4 5 2 4 5 0 S HPSEC BioSilect SEC 4005 50mM Hepes NaCl 2M urea, pH 7 CHT ——親和： 純化轉(zhuǎn)基因羊奶中的重組人 α1抗胰蛋白酶 工藝路線選擇 圖 1 CHTI柱純化 α1AT。柱尺寸： 7 52mm(10ml)；上樣量： ； Buffer A： 10mM磷酸鈉緩沖液（ ）； Buffer B： 400mM磷酸鈉緩沖液（ ）；梯度： 05%B和 530%B各 5個(gè)柱體積， 30100%B 10個(gè)柱體積；流速： ml/min。分部收集組分為 ，收集如下：收集組分 IVIII分別為：運(yùn)行組分（圖上方軸） 121 232 424 4950、 515 545 6971和 7477。綠條框指示為α1AT洗脫液。 PI Step 1： CHTI的結(jié)果： CHT ——親和： 純化轉(zhuǎn)基因羊奶中的重組人 α1抗胰蛋白酶 工藝路線選擇 Step 2：固定化銅親合層析（ IMAC）的結(jié)果： 在 CHTI柱純化由 IMAC得到的產(chǎn)品。上樣量：5ml；其它條件同圖 1。收集組分 IVII分別為運(yùn)行組分（圖上方軸）的 131 202 232 404495 6365和 6871。綠條框指示為 α1AT洗脫液。 收集餾分的 SDS PAGE分析圖。泳道 1： HSA；泳道 2： α1AT（ Sigma）；泳道 3：上樣液；泳道 410：圖 3之收集餾分 IVII His/GST等標(biāo)記的重組蛋白質(zhì)純化 工藝路線選擇 上游的影響： HisTagged蛋白質(zhì)：包涵體表達(dá)，復(fù)性得率低，效率低 GST－ Tagged蛋白質(zhì)：一般可溶性表達(dá)，但表達(dá)量低 His－ GST－ Tagged蛋白質(zhì)：可克服上述缺點(diǎn)，但不同蛋白質(zhì)效果不同 填料選擇： Profinity IMAC－ Ni， 60um顆粒，分辨率高，可做到一步純化 小結(jié) 分離純化是 科學(xué) 加 藝術(shù) 聯(lián)系方式： 盧琳 Email： 電話： 021－ 64260808－ 61
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