血紅蛋白與核黃素的凝膠層析分離電液黎振威-資料下載頁
2025-01-06 09:08本頁面
【正文】 速即開始洗脫。 注意在加樣和洗脫過程中應(yīng)緩慢加入液體，防止沖壞床表面，影響分辨率 。 ? （ 6）收集與測定。 收集時可使用自動部分收集器或手工操作，每管接洗脫液 降至基線附近。收集后用 721E型分光光度計在451nm波長處以洗脫液為空白，對每管收集液進(jìn)行光吸收測定。以收集管數(shù)（或洗脫體積）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制洗脫曲線。 [注 ] 市售凝膠如需徹底處理，可在溶脹后再用中浸泡半小時，但注意必須避免在酸或堿中加熱。另外，用過的凝膠柱如需再生，可用堵住網(wǎng)孔的雜質(zhì)，然后用蒸餾水洗至中性備有。一般使用幾次后就需要再生了。 思考題 ? （ 1）說明凝膠層析的原理 ? 答： 單個凝膠珠本身象個“篩子”。不同類型凝膠的篩孔的大小不同。如果將這樣的凝膠裝入一個足夠長的柱子中，作成一個凝膠柱。當(dāng)含有大小不同的蛋白質(zhì)樣品加到凝膠柱上時，比凝膠珠平均孔徑小的蛋白質(zhì)就要連續(xù)不斷地穿入珠子的內(nèi)部，這樣的小分子不但其運動路程長，而且受到來自凝膠珠內(nèi)部的阻力也很大，所以越小的蛋白質(zhì)，把它們從柱子上洗脫下來所花費的時間越長！凝膠中只有很少的孔徑可接受大的蛋白。因此， 大的蛋白質(zhì)直接通過凝膠珠之間的縫隙首先被洗脫下來 。凝膠過濾所用的凝膠孔徑大小的選擇主要取決于要純化的蛋白質(zhì)分子量。 ? （ 2）層析柱中的“紋路”，氣泡和凹凸不平的床表面對層析效果有何影響？ ? （ 3）連接高位貯液瓶與層析柱之間的 U形導(dǎo)管，有防止層析床液體流干的作用，說明其原理。 ? （ 4）恒壓貯液瓶為何能保證操作壓的恒定？
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