血紅蛋白的提取和分離(優(yōu)質課)-資料下載頁
2024-11-04 07:00本頁面
【正文】 行純度鑒定。,你能描述血紅蛋白(xu232。h243。ng d224。nb225。i)別離的完整過程嗎？,第三十六頁，共四十一頁。,④洗滌平衡：裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在50cm高的操作壓下，用300ml的20mmol/l的磷酸緩沖液〔pH為7.0〕充分洗滌平衡12小時。注意：液面不要低于凝膠外表，否那么可能有氣泡混入(h249。n r249。)，影響液體在柱內的流動與最終生物大分子物質的別離效果。不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象。,〔2〕凝膠色譜(s232。 pǔ)柱的裝填,50cm高,第三十七頁，共四十一頁。,〔3〕樣品參加(jiār249。)與洗脫,①調節(jié)緩沖液面：翻開下端出口，使柱內緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊，關閉出口。 ②滴加透析樣品：吸管吸1ml樣品加到色譜柱的頂端，滴加樣品時，吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動加樣，同時注意不要破壞凝膠面。 ③樣品滲入凝膠床：加樣后翻開下端出口，使樣品滲入凝膠床內，等樣品完全(w225。nqu225。n)進入凝膠層后，關閉下端出口。 ④洗脫：小心參加pH=7.0 的20mmol/l的磷酸緩沖液到適當高度，連接緩沖液洗脫瓶，翻開下端出口進行洗脫。 ⑤收集：待紅色的蛋白質接近色譜柱底端時，用試管收集流出液，每5ml收集一試管，連續(xù)收集?！苍趧e離過程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動，說明色譜柱制作成功〕 ⑥注意：正確的加樣操作：不要觸及并破壞凝膠面。貼壁加樣。使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動。,第三十八頁，共四十一頁。,〔3〕樣品參加(jiār249。)與洗脫,注意：正確(zh232。ngqu232。)的加樣操作是：不要觸及并破壞凝膠面。貼壁加樣。使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動。,第三十九頁，共四十一頁。,觀察(guānch225。)你處理的血液樣品離心后是否分層〔見教科書圖518〕，如果分層不明顯，可能是洗滌次數少、未能除去血漿蛋白的原因。此外，離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純潔的紅細胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。,三、實驗結果(jiē guǒ)分析與評價,你是否完成了對血液樣品的處理？你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些(nǎxiē)變化嗎？,你裝填的凝膠色譜柱是否有氣泡產生？你的色譜柱裝填得成功嗎？你是如何判斷的？,由于凝膠是一種半透明的介質，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。此外，還可以參加大分子的有色物質，例如藍色葡聚糖—2000或紅色葡聚糖，觀察色帶移動的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。,第四十頁，共四十一頁。,內容(n232。ir243。ng)總結,血紅蛋白的提取與別離。N,N’亞甲基雙丙烯酰胺〔形成交聯(lián)〕。N,N’亞甲基雙丙烯酰胺的交聯(lián)共聚反響。樣品處理→粗別離→純化→純度鑒定。吸取血漿：上層透明的黃色血漿。裝填凝膠柱時不得有氣泡存在：因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低別離效果。連接緩沖液洗脫瓶，翻開下端(xi224。 duān)出口進行洗脫。⑤收集：待紅色的蛋白質接近色譜柱底端時，用試管收集流出。你是如何判斷的。純度鑒定:聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定,第四十一頁，共四十一頁。
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