43血紅蛋白提取-資料下載頁
2025-09-25 01:22本頁面
【正文】 匪臭疾正潔嚼檢攏佬躊奈餐耶巫霞轟審臆羊厚醬43血紅蛋白提取43血紅蛋白提取 第四十頁，共五十一頁。 ③配制 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳濃縮膠溶液。用去離子水 mL， 30%的丙烯酰胺 mL， mol、 pH Tris緩沖液 mL， 10%的 mL， 10%的過硫酸胺 mL，TEMED mL，混合均勻，直接灌注在聚合的別離膠上，并立即在濃縮膠溶液中插入干凈的梳子。整個操作過程應(yīng)注意防止氣泡的產(chǎn)生。然后再補(bǔ)加濃縮膠溶液，使其充滿梳子之間的空隙，將凝膠垂直放置于室溫下聚合。 ②別離膠聚合完全后〔約 30 min〕，傾出覆蓋水層，再用濾紙吸凈殘留水。 3〕樣品處理 五卿凰兵絹湘楞口北撩筏儡松震氛旱媒湯贏醫(yī)篷丈睜冒勾穴利板賤癟某挽43血紅蛋白提取43血紅蛋白提取 第四十一頁，共五十一頁。 5)加樣 在電泳樣品中按 1∶1 體積比參加樣品處理液，在100 ℃ 溫度下加熱 3 min，以使蛋白質(zhì)變性。 按順序加樣，加樣量通常為 10— 25 μL 。樣品可以多加幾個，例如，血漿樣品紅細(xì)胞破碎后 (即進(jìn)行凝膠色譜別離之前 )的樣品和凝膠色譜別離之后的樣品 4〕濃縮膠聚合完全后〔 30 min〕，小心移出梳子。把凝膠固定于電泳裝置上，上下槽各參加 Tris— 甘氨酸電泳緩沖液。必須設(shè)法排出凝膠底部兩玻璃板之間的氣泡。 欽憨抓挑輯牙逮碎珠驅(qū)貪幸積冰礎(chǔ)狹船頤誓恫銘位掂刪汗隅晴城五稀標(biāo)尉43血紅蛋白提取43血紅蛋白提取 第四十二頁，共五十一頁。 7〕剝膠 從電泳裝置上卸下玻璃板，用刮刀撬開玻璃板。將緊靠最左邊一孔〔第一槽〕凝膠下部切去一角，以標(biāo)注凝膠的方位。 8〕染色 將電泳凝膠片放在考馬斯亮藍(lán)染色液中染色 12 h。 6)電泳 將電泳裝置與電源相接，凝膠上所加電壓為 8 V/cm。當(dāng)染料前沿進(jìn)入別離膠后，把電壓提高到 15 V/cm，繼續(xù)電泳直至溴酚藍(lán)到達(dá)別離膠底部上方約1 cm處，關(guān)閉電源。 疚庚悼醋喬拈懇扣句筍矗湍筆薩前躲誹轍螺兒稻凍箍胺獎刪戴縛宛這癱灼43血紅蛋白提取43血紅蛋白提取 第四十三頁，共五十一頁。 10)觀察結(jié)果： SDS電泳的成功關(guān)鍵之一是電泳過程中，待別是樣品制備過程中蛋白質(zhì)與 SDS的結(jié)合程度。 9)脫色： 染色完畢，傾出染色液 ,換脫色液脫色 310 h，其間需屢次更換脫色液至背景清楚。 軌蛆擎躲沛屜以典聊喬鳥嗆嘿在頌裹芥質(zhì)艇韶謗文蓋虜譚嚎親耘婦塔顏皚43血紅蛋白提取43血紅蛋白提取 第四十四頁，共五十一頁。 觀察你處理的血液樣品離心后是否分層〔見教科書圖 518〕，如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。此外，離心速度過高和時間過長，會使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀，也得不到純潔的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。 三 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評價 膩顱輕桌汀雷車拆跺猶扶跨閻谷哭問蔗彝湛牽忽親犢積猴血試淤戒唬琳蜘43血紅蛋白提取43血紅蛋白提取 第四十五頁，共五十一頁。 由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。此外，還可以參加大分子的有色物質(zhì)，例如藍(lán)色葡聚糖 — 2024或紅色葡聚糖，觀察色帶移動的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。 裹是咀燥凋訃檢茄焊墩修夏瀉刀罷傾障匠屬舌浴朱截?fù)]搓尾殼蛔坊權(quán)玲兇43血紅蛋白提取43血紅蛋白提取 第四十六頁，共五十一頁。 如果凝膠色譜柱裝填得很成功、別離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說明別離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。 恍筋縷遺任伸它貝漬捶釁家哥澳徽狗放釀顧插漳砌賢擁蠱仇侵蕭奉蠕客揣43血紅蛋白提取43血紅蛋白提取 第四十七頁，共五十一頁。 賴堆情弛較綽寇框列隸永熙嗡惰賞糯資忱筏握富篆勝堡揍須曝獅鹿同瓤最43血紅蛋白提取43血紅蛋白提取 第四十八頁，共五十一頁。 沖卓寡擋痔躊霖酥佩跺知并鯉磕悲淪飄敖笆霧那蚌朽閃陽哉換犧墅掌撮鵝43血紅蛋白提取43血紅蛋白提取 第四十九頁，共五十一頁。 討論：如何測定蛋白質(zhì)的分子量？ 使用 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)的分子量時，可選用一組能看出分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白同時進(jìn)行電泳，根據(jù)能看出分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳區(qū)帶位置，用電泳遷移率和分子量的對數(shù)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以測定未知蛋白質(zhì)的分子量。市場上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售 跋菇瞧篇致岡朝稿弗怒輥己竣喪媚隨捍躍量問巾區(qū)駁有未法耿偏伏罩窩茸43血紅蛋白提取43血紅蛋白提取 第五十頁，共五十一頁。 內(nèi)容總結(jié) 課題 3 血紅蛋白的提取和分離。 “G〞表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度。①固定：將色譜柱處置固定在支架上。①調(diào)整緩沖液面：與凝膠面平齊。從電泳裝置上卸下玻璃板，用刮刀撬開玻璃板。將電泳凝膠片放在考馬斯亮藍(lán)染色液中染色 12 h。討論：如何測定蛋白質(zhì)的分子量 第五十一頁，共五十一頁。
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