血紅蛋白的提取和分離(優(yōu)質(zhì)課)-文庫吧
2025-10-21 07:00 本頁面
【正文】 √,√,3.類型(l232。ix237。ng):,瓊脂糖凝膠電泳、聚丙稀酰胺凝膠電泳。,第十頁，共四十一頁。,在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反(xiāngfǎn)的電極移動(dòng),瓊脂糖凝膠電泳示意圖,第十一頁，共四十一頁。,聚丙烯酰胺凝膠電泳,測定蛋白質(zhì)分子量:常用十二(sh237。 232。r)烷基硫酸鈉〔SDS〕—聚丙烯酰胺凝膠電泳。 聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N’亞甲基雙丙烯酰胺在引發(fā)劑和催化劑的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。,N,N’亞甲基雙丙烯酰胺〔形成(x237。ngch233。ng)交聯(lián)〕,丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N’亞甲基雙丙烯酰胺的交聯(lián)共聚反響,第十二頁，共四十一頁。,蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取于它所帶凈電荷(di224。nh232。)的多少以及分子的大小等因素。,2.原理(yu225。nlǐ)：,SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。解聚成單條肽鏈，因此測定的結(jié)果只是(zhǐsh236。)單條肽鏈的分子量。SDS能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物，SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量。因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差異，使電泳遷移率完全取決于分子的大小。,3. SDS作用機(jī)理:,第十三頁，共四十一頁。,用SDS測定(c232。d236。ng)蛋白質(zhì)分子量的方法,使用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)的分子量時(shí)，可選用一組分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白同時(shí)(t243。ngsh237。)進(jìn)行電泳，根據(jù)分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳區(qū)帶位置，可以測定未知蛋白質(zhì)的分子量。市場上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售。,第十四頁，共四十一頁。,電泳檢測(jiǎn c232。)結(jié)果,第十五頁，共四十一頁。,實(shí)驗(yàn)(sh237。y224。n)操作,樣品處理→粗別離(fēnl237。)→純化→純度鑒定,1.樣品(y224。ngpǐn)處理：,〔一〕蛋白質(zhì)提取和別離步驟,〔二〕操作過程,可選用豬、牛、羊或其他脊椎動(dòng)物的血液來別離血紅蛋白。,第十六頁，共四十一頁。,2.提問(t237。w232。n)：血液有哪些成分？,1.提問：用雞的紅細(xì)胞提取(t237。qǔ)DNA，用豬、牛、羊的紅細(xì)胞提取血紅蛋白的原因是什么？,雞的紅細(xì)胞具有(j249。yǒu)細(xì)胞核，含有DNA，便于進(jìn)行DNA的提??；人的紅細(xì)胞無細(xì)胞核，結(jié)構(gòu)簡單，血紅蛋白含量豐富，便于提取血紅蛋白。,第十七頁，共四十一頁。,每個(gè)肽鏈環(huán)繞一個(gè)亞鐵血紅素基團(tuán)，此基團(tuán)可攜帶一分子(fēnzǐ)O2或一分子CO2，血紅蛋白因含有血紅素而呈紅色。,血紅蛋白(xu232。h243。ng d224。nb225。i)的特點(diǎn)：,第十八頁，共四十一頁。,(1)紅細(xì)胞的洗滌(xǐd237。):,去除(q249。 ch)雜質(zhì)蛋白，利于后續(xù)血紅蛋白的別離純化.,采集血樣 低速短時(shí)間離心〔速度越高和時(shí)間越長，會(huì)使白細(xì) 胞等一同沉淀，達(dá)不到別離的效果〕 吸取血漿：上層透明的黃色血漿。 鹽水洗滌：下層暗紅色的紅細(xì)胞+五倍體積的0.9％ 的NaCl溶液(r243。ngy232。)洗滌，攪拌10min 低速短時(shí)間離心： 重復(fù)5步驟三次 上清液中已沒有黃色：紅細(xì)胞洗滌干凈。,①目的:,②操作：,洗滌次數(shù)過少,無法除去血漿蛋白。,
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