血紅蛋白的提取和分離(優(yōu)質(zhì)課)(參考版)
2024-11-04 07:00本頁(yè)面
【正文】 ,。你是如何判斷的。 duān)出口進(jìn)行洗脫。裝填凝膠柱時(shí)不得有氣泡存在：因?yàn)闅馀輹?huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低別離效果。樣品處理→粗別離→純化→純度鑒定。N,N’亞甲基雙丙烯酰胺〔形成交聯(lián)〕。ir243。,第四十頁(yè)，共四十一頁(yè)。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。,三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(jiē guǒ)分析與評(píng)價(jià),你是否完成了對(duì)血液樣品的處理？你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些(nǎxiē)變化嗎？,你裝填的凝膠色譜柱是否有氣泡產(chǎn)生？你的色譜柱裝填得成功嗎？你是如何判斷的？,由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。)你處理的血液樣品離心后是否分層〔見教科書圖518〕，如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。,第三十九頁(yè)，共四十一頁(yè)。貼壁加樣。ngqu232。,〔3〕樣品參加(jiār249。使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動(dòng)?！苍趧e離過程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動(dòng)，說明色譜柱制作成功〕 ⑥注意：正確的加樣操作：不要觸及并破壞凝膠面。 ④洗脫：小心參加pH=7.0 的20mmol/l的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度，連接緩沖液洗脫瓶，翻開下端出口進(jìn)行洗脫。nqu225。 ②滴加透析樣品：吸管吸1ml樣品加到色譜柱的頂端，滴加樣品時(shí)，吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動(dòng)加樣，同時(shí)注意不要破壞凝膠面。,〔3〕樣品參加(jiār249。,〔2〕凝膠色譜(s232。)，影響液體在柱內(nèi)的流動(dòng)與最終生物大分子物質(zhì)的別離效果。注意：液面不要低于凝膠外表，否那么可能有氣泡混入(h249。i)別離的完整過程嗎？,第三十六頁(yè)，共四十一頁(yè)。ng d224。,你能描述血紅蛋白(xu232。)： 樣品處理、粗別離、純化和純度鑒定。,第三十五頁(yè)，共四十一頁(yè)。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。 fǒu)有氣泡產(chǎn)生？你的色譜柱裝填得成功嗎？你是如何判斷的？,由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此(yīncǐ)可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。 fǒu)完成了對(duì)血液樣品的處理？你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些變化嗎？,第三十四頁(yè)，共四十一頁(yè)。jiān)過長(zhǎng)，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀，也得不到純潔的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。,觀察處理的血液樣品離心后是否分層，如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。這使血紅蛋白的別離過程非常直觀，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。ng)正常。)后的蛋白,第三十二頁(yè)，共四十一頁(yè)。,收集得到的純化(ch)環(huán)繞移動(dòng)。貼壁加樣。,〔3〕樣品(y224。 ⑤收集：待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出 液，每5ml收集一試管，連續(xù)收集。 貼壁加樣 吸管管口貼著管壁(ɡuǎn b236。,〔3〕樣品參加(jiār249。,〔2〕凝膠色譜(s232。 注意： 液面不要低于凝膠外表，否那么可能有氣泡混入，影響別離(fēnl237。,第二十八頁(yè)，共四十一頁(yè)。p224。 B、裝填：將凝膠懸浮液一次性緩慢倒入色譜柱 內(nèi)，裝填時(shí)輕輕敲動(dòng)色譜柱，使凝膠填裝均勻 注意： 裝填時(shí)盡量緊密：降低凝膠顆粒之間的空隙。 pǔ)操作:,第二十七頁(yè)，共四十一頁(yè)。 ②凝膠的前處理： 配置凝膠懸浮液： 計(jì)算并稱取一定量的凝膠浸泡于蒸
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