血紅蛋白的提取和分離(優(yōu)質(zhì)課)(編輯修改稿)
2024-11-04 07:00 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 第十九頁(yè)，共四十一頁(yè)。,(2)血紅蛋白(xu232。h243。ng d224。nb225。i)的釋放：,加蒸餾水到原血液(xu232。y232。)體積，,加40％體積的甲苯(jiǎ běn) 〔溶解細(xì)胞膜〕,置于磁力攪拌器攪拌10min〔加速細(xì)胞破裂〕,紅細(xì)胞破裂，釋放出血紅蛋白,第二十頁(yè)，共四十一頁(yè)。,(3)別離(fēnl237。)血紅蛋白溶液：,①過程：將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以2000r/min的速度(s249。d249。)離心10 min。,②試管中溶液層次： 第1層〔最上層〕：甲苯層〔無色透明〕； 第2層〔中上層〕：脂溶性物質(zhì)沉淀層〔白色(b225。is232。)薄層固體〕； 第3層〔中下層〕：血紅蛋白的水溶液層〔紅色透明液體〕； 第4層〔最下層〕：雜質(zhì)沉淀層〔暗紅色〕。,③別離： 濾紙過濾：除去脂溶性沉淀層， 分液漏斗中靜置：分出下層的紅色透明液體。,第二十一頁(yè)，共四十一頁(yè)。,甲苯(jiǎ běn)層〔無色透明〕,白色(b225。is232。)薄層固體,紅色(h243。ngs232。)透明液體,雜質(zhì)沉淀層〔暗紅色〕,試管中溶液層次,第二十二頁(yè)，共四十一頁(yè)。,(4)透 析：,①過程： 取1ml的血紅蛋白溶液(r243。ngy232。)裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300ml的20mmol/l的磷酸緩沖液中〔pH為7.0〕，透析12h,②目的(m249。d236。)： 除去樣品中分子量較小的雜質(zhì)和離子。 或用于更換樣品的緩沖液。,第二十三頁(yè)，共四十一頁(yè)。,透析過程(gu242。ch233。ng)動(dòng)畫演示,第二十四頁(yè)，共四十一頁(yè)。,利用(l236。y242。ng)透析袋透析,第二十五頁(yè)，共四十一頁(yè)。,2.凝膠色譜(s232。 pǔ)操作:,〔1〕凝膠色譜(s232。 pǔ)柱的制作：,①取長(zhǎng)40厘米，內(nèi)徑1.6厘米的玻璃管，兩端磨平。 ②底塞的制作： 打孔→挖出凹穴→安裝移液管頭部→覆蓋尼龍網(wǎng)，再用100目尼龍紗包好，插到玻璃管的一端。本卷須知：玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否那么難以鋪實(shí)尼龍網(wǎng)，還會(huì)導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)別離(fēnl237。)不徹底。 ③頂塞的制作：打孔→安裝玻璃管。 ④組裝：將上述三者按相應(yīng)位置組裝成一個(gè)整體。 ⑤安裝其他附屬結(jié)構(gòu)。,第二十六頁(yè)，共四十一頁(yè)。,〔2〕凝膠色譜(s232。 pǔ)柱的裝填,①凝膠的選擇： A、材料：交聯(lián)葡聚糖凝膠〔G75〕。 B、代表意義：“G〞表示凝膠的交聯(lián)程度(ch233。ngd249。)，膨脹程度(ch233。ngd249。) 及別離范圍。 75表示凝膠的得水值，即每克凝膠膨 脹時(shí)吸水7.5克。 ②凝膠的前處理： 配置凝膠懸浮液： 計(jì)算并稱取一定量的凝膠浸泡于蒸餾水或洗脫液中 充分溶脹后，配成凝膠懸浮液。,2.凝膠色譜(s232。 pǔ)操作:,第二十七頁(yè)，共四十一頁(yè)。,③凝膠色譜柱的裝填方法： A、固定：將色譜柱裝置固定在支架上。 B、裝填：將凝膠懸浮液一次性緩慢倒入色譜柱 內(nèi)，裝填時(shí)輕輕敲動(dòng)色譜柱，使凝膠填裝均勻 注意： 裝填時(shí)盡量緊密：降低凝膠顆粒之間的空隙。 裝填凝膠柱時(shí)不得有氣泡(q236。p224。o)存在：因?yàn)闅馀輹?huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低別離效果。,第二十八頁(yè)，共四十一頁(yè)。,④洗滌平衡： 連接緩沖液洗脫瓶，在50cm高的操作壓下，用30
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