血紅蛋白的提取與分離-文庫(kù)吧
2025-10-21 07:00 本頁(yè)面
【正文】 溶液PH發(fā)生明顯變化的作用叫做緩沖作用，具有緩沖作用的溶液叫做緩沖溶液,能夠抵抗外界的酸或堿的對(duì)溶液的PH值的影響，維持PH根本不變,作用,第十四頁(yè)，共六十三頁(yè)。,緩沖溶液(huǎn chōnɡ r243。nɡ y232。)的組分分類(lèi),①弱酸(ru242。 suān)和弱酸(ru242。 suān)鹽組合,緩沖溶液(huǎn chōnɡ r243。nɡ y232。)的配制,通常由1－2種緩沖劑溶解于水中配制而成。調(diào)節(jié)緩沖劑的使用比例就可以制得在不同PH范圍內(nèi)使用的緩沖液,第十五頁(yè)，共六十三頁(yè)。,②弱堿(ru242。 jiǎn)和弱堿(ru242。 jiǎn)鹽,③多元弱酸的酸式鹽和其他(q237。tā)所對(duì)應(yīng)的次級(jí)鹽,第十六頁(yè)，共六十三頁(yè)。,思考：在血紅蛋白整個(gè)實(shí)驗(yàn)室中用(zhōngy242。ng)的緩沖液是什么？它的目的是什么？,使用的是磷酸緩沖液，目的是利用緩沖液模擬細(xì)胞內(nèi)的PH環(huán)境，保證血紅蛋白的正常(zh232。ngch225。ng)結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察(紅色)和科學(xué)研究(活性),第十七頁(yè)，共六十三頁(yè)。,〔五〕電泳(di224。n yǒnɡ)：,概念(g224。ini224。n),帶電粒子在電場(chǎng)作用(zu242。y242。ng)下發(fā)生遷移的過(guò)程,原理,②在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng),①許多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解離的基團(tuán)，在一定的PH下，這些基團(tuán)會(huì)帶上正電或負(fù)電,第十八頁(yè)，共六十三頁(yè)。,③電泳利用了待別離樣品中各種分子帶電(d224。i di224。n)性質(zhì)的差異以及分子本身的大小，形狀的不同使帶電(d224。i di224。n)分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的別離,第十九頁(yè)，共六十三頁(yè)。,類(lèi)型(l232。ix237。ng),瓊脂糖凝膠電泳和聚丙稀酰胺凝膠電泳,實(shí)例(sh237。l236。),由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N甲叉雙丙烯酰胺在引發(fā)劑和催化劑的作用(zu242。y242。ng)下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠,十二烷基磺酸鈉〔SDS〕—聚丙稀酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)分子量,①應(yīng)用,②聚丙稀酰胺凝膠,第二十頁(yè)，共六十三頁(yè)。,第二十一頁(yè)，共六十三頁(yè)。,第二十二頁(yè)，共六十三頁(yè)。,蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于它所帶靜電荷的多少以及分子的大小(d224。xiǎo)等因素,③原理(yu225。nlǐ),④ SDS作用(zu242。y242。ng),為了消除靜電荷對(duì)遷移率的影響可以在凝膠中參加SDS,第二十三頁(yè)，共六十三頁(yè)。,SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。由幾條肽鏈組成的蛋白質(zhì)復(fù)合體在SDS的作用下會(huì)解聚成單條肽鏈，因此測(cè)定(c232。d236。ng)的結(jié)果只是單條肽鏈的分子量。SDS能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物，SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有電荷量。因而掩蓋了不同種電荷間的電荷差異，使電泳遷移率完全取決于分子的大小,⑤ SDS作用(zu242。y242。ng)機(jī)理,第二十四頁(yè)，共六十三頁(yè)。,討論：如何(rh233。)測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量？,使用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳(di224。n yǒnɡ)測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量時(shí)，可選用一組分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白同時(shí)進(jìn)行電泳(di224。n yǒnɡ)，根據(jù)分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳(di224。n yǒnɡ)區(qū)帶位置，用電泳(di224。n yǒnɡ)遷移率和分子量的對(duì)數(shù)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以測(cè)定未知蛋白質(zhì)的分子量。市場(chǎng)上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售.,第二十五頁(yè)，共六十三頁(yè)。,二、實(shí)驗(yàn)(sh237。y224。n)操作,樣品處理——粗別離(fēnl237。)——純化——純度鑒定,樣品(y224。ngpǐn)處理,〔一〕蛋白質(zhì)提取和別離步驟,(1)血液組成,〔二〕操作過(guò)程,第二十六頁(yè)，共六十三頁(yè)。,①成分(ch233。ng f232。n),第二十七頁(yè)，共六十三頁(yè)。,每個(gè)肽鏈環(huán)繞一個(gè)亞鐵血紅素基團(tuán)(jī tu225。n)，此基團(tuán)可攜帶一分子氧或一分子二氧化碳，血紅蛋白因含有血紅素而呈紅色,②組成(zǔ ch233。nɡ)及作用,本課題可選用豬、牛、羊或其他(q237。tā)脊椎動(dòng)物的血液來(lái)別離血紅蛋白,③選材,第二十八頁(yè)，共六十三頁(yè)。,第二十九頁(yè)，共六十三頁(yè)。,(2)紅細(xì)胞的洗滌(xǐd237。),①洗滌(xǐd237。)紅細(xì)胞目的,除去其中的雜蛋白，以利于后續(xù)血紅蛋白(xu232。h243。ng d224。nb225
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