血紅蛋白的提取和分離(第1課時)-資料下載頁
2025-08-16 01:36本頁面
【正文】 A．一般凝膠色譜柱直徑的大小不影響分離的效果 B．凝膠色譜柱過高超過 1 m，不影響分離的效果 C．凝膠色譜柱過矮，則影響混合物的分離度 D．凝膠色譜柱直徑過大會耗用過多洗脫液，樣品的稀釋度過大 （三） SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳（選做） ： 鑒定血紅蛋白純度。 ： ：（略） 收集得到的純化后的蛋白 觀察你處理的血液樣品離心后 是否分層（見教科書圖 518）， 如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。 此外，離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。 三、實驗結果分析與評價 你是否完成了對血液樣品的處理？你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些變化嗎？ 三、實驗結果分析與評價 你裝填的凝膠色譜柱是否有氣泡產生？你的色譜柱裝填得成功嗎？你是如何判斷的？ 由于凝膠是一種半透明的介質，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。此外，還可以加入大分子的有色物質， 例如藍色葡聚糖 — 2022或紅色葡聚糖，觀察色帶移動的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。 如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。 如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶 均勻、狹窄、平整 ，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區(qū)帶 歪曲、散亂、變寬 ，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關。 你能觀察到蛋白質的分離過程中紅色區(qū)帶的移動嗎？請描述紅色區(qū)帶的移動情況，并據(jù)此判斷分離效果？ 血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括： 樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定 。首先通過洗滌紅細胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到 血紅蛋白溶液， 即 :樣品的處理；再經過透析去除分子量較小的雜質，即樣品的粗分離；然后 通過凝膠色譜法 將相對分子質量較大的 雜質蛋白除去， 即 :樣品的純化；最后經 聚丙烯酰胺凝膠電泳 進行純度鑒定。 你能描述血紅蛋白分離的完整過程嗎？ 思考下面的問題： 讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的 pH范圍內，維持結構和功能正常。 在血紅蛋白純化的整個過程中不斷用磷酸緩沖液處理的目的是什么？ 與其他蛋白質相比，血紅蛋白有什么特點？這一特點對你進行血紅蛋白的分離有什么啟示？ 血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過觀察顏色來判斷什么時候應該收集洗脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作。
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