血紅蛋白的提取和分離(第1課時(shí))-資料下載頁(yè)
2025-08-16 01:36本頁(yè)面
【正文】 A．一般凝膠色譜柱直徑的大小不影響分離的效果 B．凝膠色譜柱過(guò)高超過(guò) 1 m，不影響分離的效果 C．凝膠色譜柱過(guò)矮，則影響混合物的分離度 D．凝膠色譜柱直徑過(guò)大會(huì)耗用過(guò)多洗脫液，樣品的稀釋度過(guò)大 （三） SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳（選做） ： 鑒定血紅蛋白純度。 ： ：（略） 收集得到的純化后的蛋白 觀察你處理的血液樣品離心后 是否分層（見(jiàn)教科書(shū)圖 518）， 如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。 此外，離心速度過(guò)高和時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 你是否完成了對(duì)血液樣品的處理？你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些變化嗎？ 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 你裝填的凝膠色譜柱是否有氣泡產(chǎn)生？你的色譜柱裝填得成功嗎？你是如何判斷的？ 由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。此外，還可以加入大分子的有色物質(zhì)， 例如藍(lán)色葡聚糖 — 2022或紅色葡聚糖，觀察色帶移動(dòng)的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說(shuō)明凝膠色譜柱的性能良好。 如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時(shí)要重新裝柱。 如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶 均勻、狹窄、平整 ，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區(qū)帶 歪曲、散亂、變寬 ，說(shuō)明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。 你能觀察到蛋白質(zhì)的分離過(guò)程中紅色區(qū)帶的移動(dòng)嗎？請(qǐng)描述紅色區(qū)帶的移動(dòng)情況，并據(jù)此判斷分離效果？ 血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括： 樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定 。首先通過(guò)洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到 血紅蛋白溶液， 即 :樣品的處理；再經(jīng)過(guò)透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；然后 通過(guò)凝膠色譜法 將相對(duì)分子質(zhì)量較大的 雜質(zhì)蛋白除去， 即 :樣品的純化；最后經(jīng) 聚丙烯酰胺凝膠電泳 進(jìn)行純度鑒定。 你能描述血紅蛋白分離的完整過(guò)程嗎？ 思考下面的問(wèn)題： 讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的 pH范圍內(nèi)，維持結(jié)構(gòu)和功能正常。 在血紅蛋白純化的整個(gè)過(guò)程中不斷用磷酸緩沖液處理的目的是什么？ 與其他蛋白質(zhì)相比，血紅蛋白有什么特點(diǎn)？這一特點(diǎn)對(duì)你進(jìn)行血紅蛋白的分離有什么啟示？ 血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過(guò)觀察顏色來(lái)判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液。這使血紅蛋白的分離過(guò)程非常直觀，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。
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