血紅蛋白的提取和分離(第1課時(shí))-在線瀏覽
2024-09-26 01:36本頁面
【正文】 蛋白質(zhì)分子量時(shí)常用 十二烷基硫酸鈉（ SDS） — 聚丙烯酰胺凝膠電泳。 N,N’亞甲基雙丙烯酰胺（形成交聯(lián)） 丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N’亞甲基雙丙烯酰胺的交聯(lián)共聚反應(yīng) 蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的 遷移率 取決 于它所帶 凈電荷 的多少以及 分子的大小 等因素。 ： SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性 。 SDS能與各種蛋白質(zhì)形成 蛋白質(zhì) — SDS復(fù)合物 ， SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子 原有的電荷量 。 3. SDS作用機(jī)理 : 用 SDS測定蛋白質(zhì)分子量的方法 使用 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳 測定蛋白質(zhì)的分子量時(shí)，可選用一組 已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白 同時(shí)進(jìn)行電泳，根據(jù)已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的 電泳區(qū)帶位置 ，可以測定 未知蛋白質(zhì) 的分子量。 使用 SDS聚丙烯酰胺電泳過程中，不同蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于 A 電荷的多少 B 分子的大小 C 肽鏈的多少 D 分子形狀的差異 1. 血液有哪些成分？ 二、實(shí)驗(yàn)操作： 樣品處理 → 粗分離 → 純化 → 純度鑒定 知識(shí)回顧 血液 血漿 水 分 固體物質(zhì)： 血漿蛋白、無機(jī)鹽、磷脂、葡萄糖等 血細(xì) 胞 白細(xì)胞 血小板 紅細(xì)胞 （最多） 血紅蛋白 （ 90％） 兩個(gè) α －肽鏈 兩個(gè) β 一肽鏈 四個(gè)亞鐵紅素基團(tuán) DNA，用豬、牛、羊的紅細(xì)胞提取血紅蛋白的原因是什么？ 雞的紅細(xì)胞具有細(xì)胞核，含有 DNA，便于進(jìn)行 DNA的提取；人的紅細(xì)胞無細(xì)胞核，結(jié)構(gòu)簡單，血紅蛋白含量豐富，便于提取血紅蛋白。 (1)紅細(xì)胞的洗滌 : ① 洗滌目的 : 去除雜蛋白，以利于后續(xù)血紅蛋白的 分離純化，洗滌次數(shù)不可過少。 低速短時(shí)間離心（ 速度越高和時(shí)間越長，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果 ） 吸取血漿：上層透明的黃色血漿。 低速離心（低速短時(shí)間）重復(fù) 5步驟三次，直至上清液中已沒有黃色，表明洗滌干凈。 (3)分離血紅蛋白溶液： ① 過程： 將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以 2022r/min的速度離心10 min。 ③分離： 用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的 紅色透明液體。 ②透析目的： 除去樣品中分子量較 小 的雜質(zhì)。 ②底塞的制作： 打孔 → 挖出凹穴 → 安裝移液管頭部 → 覆蓋尼龍網(wǎng)，再用 100目尼龍紗包好，插到玻璃管的 一 端 。③ 頂塞的制作： 打孔 → 安裝玻璃管 。 ⑤安裝其他附屬結(jié)構(gòu)。
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