血紅蛋白的提取與分離-在線瀏覽
2025-02-23 09:09本頁面
【正文】 的電荷差別，使電泳遷移率完全取決于分子的大小 十二烷基磺酸鈉（ SDS） — 聚丙稀酰胺凝 膠電泳測定蛋白質分子量 ①應用 為了消除靜電荷對遷移率的影響可以在凝膠中加入 ( )。由幾條肽鏈組成的蛋白質復合體在 SDS的作用下會解聚成單條肽鏈， 因此測定的結果只是( )。 因而掩蓋了不同種蛋白質間的電荷差別，使電泳遷移率完全取決于 ( )。 SDS 單條肽鏈的分子量 分子的大小 電泳檢測 PCR結果 瓊脂糖凝膠電泳 二 實驗操作 蛋白質的提取和分離一般分為四步： 血液 血漿 水分 固體物質 血漿蛋白 無機鹽 磷脂 葡萄糖等 血細胞 白細胞 血小板 紅細胞 （最多） 血紅蛋白 （ ） 兩個 a－肽鏈 兩個 β 一 肽鏈 樣品處理 —— 粗分離 —— 純化 —— 純度鑒定 共四條肽鏈 90％① 目的：去除（ ） ② 方法： （ ） 離心（速度越高和時間越長會使白細胞和淋巴細胞等一同沉淀達不到分離的效果），然后用膠頭吸管吸出上層透明的（ ），將下層（ ）的紅細胞液體倒入（ ） 每個肽鏈環(huán)繞（ ），此基團可攜帶（ ）。本課題可選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液來分離血紅蛋白。利于后續(xù)血紅蛋白的分離純化，不可洗滌次數過少。 取 ( )ml的血紅蛋白溶液裝入（ ）中，將透析袋放入盛有 300ml的物質的量濃度為 20mmol/L的（ ）中，pH為（ ），透析 12小時，目的是（ ）或用于更換樣品中的（ ）。 除去樣品中分子量較小的雜質 透析袋 磷酸緩沖液 緩沖液 (4)透析 1 1）凝膠色譜柱的制作 ① 取長 40厘米，內徑 管，兩端需用砂紙磨平。 a、選擇合適的的橡皮塞，中間打孔； b、在橡皮塞頂部切出鍋底狀的（ ），在 （ ）頭部切下（ ）長的一段，插入橡皮塞孔內，上部不得超過橡皮塞的凹穴底面。 （ ）上，用（ ）的尼龍紗將橡皮塞（ ）包好，插到玻璃管一端。 ③ 頂塞的制作： 插入安裝了玻璃管的橡皮塞 ④ 組裝：將上述三者按相應位置組裝成一個整體 。 75表示凝膠的得水值，即每克凝膠 膨脹時吸水 。 蒸餾水 凝膠懸浮液 交聯(lián)葡聚糖凝膠 ① 固定：將色譜柱處置固定在支架上 ② 裝填： 將（ ） 一次性的緩慢倒入（ ）內，裝填時輕輕敲動色譜柱，使凝膠填裝均勻。裝填凝膠柱時不能有氣泡存在： 因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分離效果。 洗滌平衡 注意液面不要低于凝膠表面，否則可能有氣泡混入，影響液體在柱內的流動與最終生物大分子物質的分離效果。 50cm 3）樣品加入與洗脫 ① 加樣前 打開下端出口，使柱內凝膠面上的（ ）緩慢下降到與（ ）平齊，關閉出口 緩沖液 凝膠面 ② 加 透析 樣 品 ① 調整緩沖液面：與凝膠
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1