血紅蛋白的提取與分離-展示頁(yè)
2025-01-15 09:09本頁(yè)面
【正文】 方法 瓊脂糖凝膠電泳和聚丙稀酰胺凝膠電泳 蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于它所帶 凈電荷的多少 以及 分子的大小 等因素 ② 原理 ③ SDS作用 為了消除 凈電荷對(duì)遷移率的影響 可以在凝膠中加入 SDS ,SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有電荷量。 1－ 2 使用比例 在不同 PH范圍內(nèi) 思考：說(shuō)出人體血液中緩沖對(duì)。 外界的酸或堿 PH值 緩沖溶液的配制 通常由（ ）種緩沖劑溶解于水中配制而成。 混合物 上 柱 洗 脫 大分子流動(dòng)快 小分子流動(dòng)慢 收 集 大分子 收 集 小分子 概念：在一定的范圍內(nèi)，能對(duì)抗外來(lái)少量強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或稍加稀釋不引起溶液PH發(fā)生明顯變化的作用叫做緩沖作用，具有緩沖作用的溶液叫做緩沖溶液。 原理： 當(dāng)不同的蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠時(shí)，相對(duì)（ ）的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程（ ），移動(dòng)速度（ ），而（ ）的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在（ ）移動(dòng)，路程（ ），移動(dòng)速度（ ），相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)因此得以分離。 思考 3 高溫滅菌和酒精滅菌分別利用蛋白質(zhì) 的何種作用，作用結(jié)果是什么被破壞？ 變性、變性、空間結(jié)構(gòu) 思考 4 人們用雞的紅細(xì)胞提取 DNA，用人 的紅細(xì)胞提取血紅蛋白的原因是什么？ 雞的紅細(xì)胞具有細(xì)胞核，含有 DNA，便于進(jìn)行 DNA的提取，人的紅細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，血紅蛋白含量豐富便于提取血紅蛋白。思考 1 分離生物大分子的基本思路是什么？ 選用一定的物理或化學(xué)的方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子。 思考 2 蛋白質(zhì)的分離和提取的原理是什么？ 根據(jù)蛋白質(zhì)各種特性的差異，如分子的形狀和大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度和吸附的性質(zhì)和對(duì)其他分子的親和力等等，可以用來(lái)分離不同蛋白質(zhì)。 一、基礎(chǔ)知識(shí)： ㈠ 凝膠色譜法（分配色譜法）： 凝膠： 一些微小多孔的球體（內(nèi)含許多貫穿的通道，由多糖類(lèi)構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖，具多孔的凝膠就叫分子篩） 概念： 根據(jù)被 分離物質(zhì)的蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的大小 ，利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，來(lái)進(jìn)行分離。 相對(duì)分子質(zhì)量較小 較長(zhǎng) 較慢 相對(duì)分子質(zhì)量較大 凝膠外部 較短 較快 大分子通過(guò)多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快 小分子穿過(guò)多孔凝膠顆粒的內(nèi)部，路程長(zhǎng)，流動(dòng)慢 洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液， 促使蛋白質(zhì)分子的差速流動(dòng)。 ㈡ 緩沖溶液： 作用： 能夠抵制（ ）的對(duì)溶液的（ ）的影響，維持 PH基本不變。調(diào)節(jié)緩沖劑的（ ）就可以制得（ ）使用的緩沖液。 NaH2PO4 / Na2HPO4 H2CO3 / NaHCO3 思考：在血紅蛋白整個(gè)實(shí)驗(yàn)室中用的緩沖液是什么？它的目的是什么？ 使用的是磷酸緩沖液，目的是利用緩沖液模擬細(xì)胞內(nèi)的 PH環(huán)境，保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察（紅色）和材料的科學(xué)研究（活性） 1）原理： 不同蛋白質(zhì)的 帶電性質(zhì) （正電荷或負(fù)電荷） 、電量、形狀和大小 不同，在電場(chǎng)中受到的作用力 大小、方向、阻力 不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的 運(yùn)動(dòng)方向 和 運(yùn)動(dòng)速度 不同 。因而掩蓋了不同種電荷間
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