血紅蛋白的提取和分離(第1課時)-免費閱讀
【正文】 首先通過洗滌紅細胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到 血紅蛋白溶液， 即 :樣品的處理；再經(jīng)過透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；然后 通過凝膠色譜法 將相對分子質(zhì)量較大的 雜質(zhì)蛋白除去， 即 :樣品的純化；最后經(jīng) 聚丙烯酰胺凝膠電泳 進行純度鑒定。 ： ：（略） 收集得到的純化后的蛋白 觀察你處理的血液樣品離心后 是否分層（見教科書圖 518）， 如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。 ⑤收集： 待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時，用試管收集流出液，每 5ml收集一試管，連續(xù)收集 。 裝填凝膠柱時不得有氣泡存在： 因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果 。 ⑤安裝其他附屬結構。 ③分離： 用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的 紅色透明液體。 (1)紅細胞的洗滌 : ① 洗滌目的 : 去除雜蛋白，以利于后續(xù)血紅蛋白的 分離純化，洗滌次數(shù)不可過少。 ： SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性 。 ： ① 許多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有 可解離的基團 ，在一定的 pH下，這些基團會 帶上正電或負電 。 一、血紅蛋白的提取和分離 一、基礎知識 （一）凝膠色譜法（分配色譜法） 根據(jù) 分離蛋白質(zhì)的有效方法。 凝膠是一些 微小 的 多孔 球體，由 多糖類化合物 （如葡聚糖、瓊脂糖等）構成。 ② 在電場的作用下，這些帶電分子會向著與其 所帶電荷相反 的電極移動。 由幾條肽鏈組成的 蛋白質(zhì)復合體 在 SDS的作用下會 解聚成單條肽鏈 ，因此測定的結果只是 單條肽鏈的分子量 。 ② 洗滌操作： 采集血樣。 (4)透析： (粗分離 ) ①過程： 取 1ml的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有 300ml的物質(zhì)的量濃度為 20mmol/l的磷酸緩沖液 中（ pH為 ），透析 12小時 。 （ 2）凝膠色譜柱的裝填 ① 凝膠的選擇： A、材料： 交聯(lián)葡聚糖凝膠（ G75）。 ④ 洗滌平衡： 裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在50cm高的操作壓下，用 300ml的 20mmol/l的 磷酸緩沖液（ pH為 ） 充分洗滌平衡 12小時。（在分離過程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動，說明色譜柱制作成功） ⑥ 注意： 正確的加樣操作： 不要觸及并破壞凝膠面。 此外，離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細胞，影響
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