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血紅蛋白的提取和分離(第1課時)(留存版)

2025-09-30 01:36上一頁面

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【正文】 使用的緩沖液。 使用 SDS聚丙烯酰胺電泳過程中,不同蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于 A 電荷的多少 B 分子的大小 C 肽鏈的多少 D 分子形狀的差異 1. 血液有哪些成分? 二、實驗操作: 樣品處理 → 粗分離 → 純化 → 純度鑒定 知識回顧 血液 血漿 水 分 固體物質(zhì): 血漿蛋白、無機鹽、磷脂、葡萄糖等 血細 胞 白細胞 血小板 紅細胞 (最多) 血紅蛋白 ( 90%) 兩個 α -肽鏈 兩個 β 一肽鏈 四個亞鐵紅素基團 DNA,用豬、牛、羊的紅細胞提取血紅蛋白的原因是什么? 雞的紅細胞具有細胞核,含有 DNA,便于進行 DNA的提?。蝗说募t細胞無細胞核,結(jié)構(gòu)簡單,血紅蛋白含量豐富,便于提取血紅蛋白。③ 頂塞的制作: 打孔 → 安裝玻璃管 。 ③樣品滲入凝膠床: 加樣后打開下端出口,使樣品滲入凝膠床內(nèi),等樣品完全進入凝膠層后,關(guān)閉下端出口。 如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話,能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶 均勻、狹窄、平整 ,隨著洗脫液緩慢流出;如果紅色區(qū)帶 歪曲、散亂、變寬 ,說明分離的效果不好,這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。 三、實驗結(jié)果分析與評價 你是否完成了對血液樣品的處理?你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些變化嗎? 三、實驗結(jié)果分析與評價 你裝填的凝膠色譜柱是否有氣泡產(chǎn)生?你的色譜柱裝填得成功嗎?你是如何判斷的? 由于凝膠是一種半透明的介質(zhì),因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈,檢查凝膠是否裝填得均勻。 ( 2)凝膠色譜柱的裝填 50cm高 注意: 液面不要低于凝膠表面,否則可能有氣泡混入,影響液體在柱內(nèi)的流動與最終生物大分子物質(zhì)的分離效果。 ②透析目的: 除去樣品中分子量較 小 的雜質(zhì)。 SDS能與各種蛋白質(zhì)形成 蛋白質(zhì) — SDS復(fù)合物 , SDS所帶負電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子 原有的電荷量 。 凝膠粒 相對分子質(zhì)量的大小 原理: 當(dāng)不同的蛋白質(zhì)通過凝膠時 相對分子質(zhì)量較小 相對分子質(zhì)量較大 凝膠內(nèi)部的通道 容易進入 無法進入凝膠內(nèi)部的通道 只能在 凝膠外部 移動 路程 較長 移動速度 較慢 路程 較短 移動速度 較快 相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)因此得以分離。 :在本課題中使用的緩沖液是 :__________ , 其目的是 : 利用緩沖液模擬細胞內(nèi)的 PH環(huán)境, 保證 血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能,便于觀察 (
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