血紅蛋白的提取和分離(第1課時)(參考版)
2024-08-27 01:36本頁面
【正文】 這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作。 你能描述血紅蛋白分離的完整過程嗎？ 思考下面的問題： 讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的 pH范圍內(nèi)，維持結(jié)構(gòu)和功能正常。 你能觀察到蛋白質(zhì)的分離過程中紅色區(qū)帶的移動嗎？請描述紅色區(qū)帶的移動情況，并據(jù)此判斷分離效果？ 血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括： 樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定 。 如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。此外，還可以加入大分子的有色物質(zhì)， 例如藍色葡聚糖 — 2022或紅色葡聚糖，觀察色帶移動的情況。 此外，離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。 ＡＣＤ 凝膠色譜柱取長為 40 cm，內(nèi)徑為 1． 6 cm，有關(guān)說法中，正確的是 (多選 ) A．一般凝膠色譜柱直徑的大小不影響分離的效果 B．凝膠色譜柱過高超過 1 m，不影響分離的效果 C．凝膠色譜柱過矮，則影響混合物的分離度 D．凝膠色譜柱直徑過大會耗用過多洗脫液，樣品的稀釋度過大 （三） SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳（選做） ： 鑒定血紅蛋白純度。貼壁加樣。 使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動。（在分離過程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動，說明色譜柱制作成功） ⑥ 注意： 正確的加樣操作： 不要觸及并破壞凝膠面。 ④洗脫： 小心加入 pH= 的 20mmol/l的磷酸緩沖液到適當高度，連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口進行洗脫。 ②滴加透析樣品： 吸管吸 1ml樣品加到色譜柱的頂端，滴加樣品時，吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動加樣，同時注意不要破壞凝膠面。 不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象 。 ④ 洗滌平衡： 裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在50cm高的操作壓下，用 300ml的 20mmol/l的 磷酸緩沖液（ pH為 ） 充分洗滌平衡 12小時。注意： 凝膠裝填時盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。 ③ 凝膠色譜柱的裝填方法： A、固定：將色譜柱裝置固定在支架上。 75表示凝膠的得水值，即每克凝膠膨脹時吸水 。 （ 2）凝膠色譜柱的裝填 ① 凝膠的選擇： A、材料： 交聯(lián)葡聚糖凝膠（ G75）。④組裝： 將上述三者按相應(yīng)位置組裝成一個整體 。 注意事項 ：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否則難以鋪實尼龍網(wǎng)，還會導致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。 透析過程動畫演示 練習鞏固 隨著人類跨入蛋白質(zhì)組時代，對蛋白質(zhì)的研究和應(yīng)用越來越深入，首先要做的
試題試卷相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1