血紅蛋白的提取和分離(第1課時(shí))-全文預(yù)覽
【正文】 pH范圍內(nèi)，維持結(jié)構(gòu)和功能正常。 如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時(shí)要重新裝柱。 此外，離心速度過高和時(shí)間過長，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。貼壁加樣。（在分離過程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動(dòng)，說明色譜柱制作成功） ⑥ 注意： 正確的加樣操作： 不要觸及并破壞凝膠面。 ②滴加透析樣品： 吸管吸 1ml樣品加到色譜柱的頂端，滴加樣品時(shí)，吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動(dòng)加樣，同時(shí)注意不要破壞凝膠面。 ④ 洗滌平衡： 裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在50cm高的操作壓下，用 300ml的 20mmol/l的 磷酸緩沖液（ pH為 ） 充分洗滌平衡 12小時(shí)。 ③ 凝膠色譜柱的裝填方法： A、固定：將色譜柱裝置固定在支架上。 （ 2）凝膠色譜柱的裝填 ① 凝膠的選擇： A、材料： 交聯(lián)葡聚糖凝膠（ G75）。 注意事項(xiàng) ：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否則難以鋪實(shí)尼龍網(wǎng)，還會(huì)導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。 (4)透析： (粗分離 ) ①過程： 取 1ml的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有 300ml的物質(zhì)的量濃度為 20mmol/l的磷酸緩沖液 中（ pH為 ），透析 12小時(shí) 。 (2)血紅蛋白的釋放： 加蒸餾水到 原血液體積 ， 再加40％體積的 甲苯 ，置于 磁力攪拌器 上充分?jǐn)嚢?10分鐘（加速細(xì)胞破裂） ,細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。 ② 洗滌操作： 采集血樣。 市場上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售。 由幾條肽鏈組成的 蛋白質(zhì)復(fù)合體 在 SDS的作用下會(huì) 解聚成單條肽鏈 ，因此測定的結(jié)果只是 單條肽鏈的分子量 。聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N’ 亞甲基雙丙烯酰胺在 引發(fā)劑 和 催化劑 的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。 ② 在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其 所帶電荷相反 的電極移動(dòng)。 : : 通常由 1－ 2 種緩沖劑 溶解于水 中配制而成。 凝膠是一些 微小 的 多孔 球體，由 多糖類化合物 （如葡聚糖、瓊脂糖等）構(gòu)成。血紅蛋白 兩個(gè) α －肽鏈 兩個(gè) β 一肽鏈 四個(gè)亞鐵 血 紅素基團(tuán) 每個(gè)肽鏈環(huán)繞一個(gè)亞鐵血紅素基團(tuán)， 此基團(tuán)可攜帶一分子氧或一分子二 氧化碳，血紅蛋白因含有血紅素而 呈紅色。 一、血紅蛋白的提取和分離 一、基礎(chǔ)知識 （一）凝膠色譜法（
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