血紅蛋白的提取和分離(第1課時(shí))-wenkub.com
2024-08-23 01:36 本頁面
【正文】 在血紅蛋白純化的整個(gè)過程中不斷用磷酸緩沖液處理的目的是什么？ 與其他蛋白質(zhì)相比，血紅蛋白有什么特點(diǎn)？這一特點(diǎn)對你進(jìn)行血紅蛋白的分離有什么啟示？ 血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過觀察顏色來判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液。 如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶 均勻、狹窄、平整 ，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區(qū)帶 歪曲、散亂、變寬 ，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評價(jià) 你是否完成了對血液樣品的處理？你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些變化嗎？ 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評價(jià) 你裝填的凝膠色譜柱是否有氣泡產(chǎn)生？你的色譜柱裝填得成功嗎？你是如何判斷的？ 由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。 使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動(dòng)。 貼壁加樣。 ③樣品滲入凝膠床： 加樣后打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口。 （ 2）凝膠色譜柱的裝填 50cm高 注意： 液面不要低于凝膠表面，否則可能有氣泡混入，影響液體在柱內(nèi)的流動(dòng)與最終生物大分子物質(zhì)的分離效果。 B、裝填：將凝膠懸浮液一次性緩慢倒入色譜柱內(nèi)，裝填時(shí)輕輕敲動(dòng)色譜柱，使凝膠填裝均勻。 B、代表意義 ： “ G” 表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分離范圍 。③ 頂塞的制作： 打孔 → 安裝玻璃管 。 ②透析目的： 除去樣品中分子量較 小 的雜質(zhì)。 (3)分離血紅蛋白溶液： ① 過程： 將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以 2022r/min的速度離心10 min。 低速短時(shí)間離心（ 速度越高和時(shí)間越長，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果 ） 吸取血漿：上層透明的黃色血漿。 使用 SDS聚丙烯酰胺電泳過程中，不同蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于 A 電荷的多少 B 分子的大小 C 肽鏈的多少 D 分子形狀的差異 1. 血液有哪些成分？ 二、實(shí)驗(yàn)操作： 樣品處理 → 粗分離 → 純化 → 純度鑒定 知識回顧 血液 血漿 水 分 固體物質(zhì)： 血漿蛋白、無機(jī)鹽、磷脂、葡萄糖等 血細(xì) 胞 白細(xì)胞 血小板 紅細(xì)胞 （最多） 血紅蛋白 （ 90％） 兩個(gè) α －肽鏈 兩個(gè) β 一肽鏈 四個(gè)亞鐵紅素基團(tuán) DNA，用豬、牛、羊的紅細(xì)胞提取血紅蛋白的原因是什么？ 雞的紅細(xì)胞具有細(xì)胞核，含有 DNA，便于進(jìn)行
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