高中生物專題5第18課時血紅蛋白的提取和分離同步課時作業(yè)新人教版選修1-wenkub.com
2024-12-01 06:17 本頁面
【正文】 二是凝膠色譜操作過程中，不能發(fā)生洗 脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象。大分子物質(zhì)由于直徑較大，不易進入凝膠顆粒的微孔，而只能分 布于顆粒之間，所以向下移動的速度較快。 ] 6． C [加樣前，打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝膠面齊平，關(guān)閉出口之后，用吸管小心地將 1 mL 透析后的樣品加到色譜柱的頂端。其中樣品處理又包括紅細胞的洗滌、血紅蛋白釋放、分離血紅蛋白溶液等步驟，其目的是獲得血紅蛋白溶液；粗分離即透析，其目的是除去樣品中相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)，故 B 項描述錯誤。 4． D [洗滌紅細胞的目的是去除血漿中除血紅蛋白以外的雜蛋白；洗滌時離心速度過大，時間過長，白細胞等會沉淀，達不到分離的效果；洗滌過程選用 %的生理鹽水。 (2)在凝膠色譜操作過程中 ，不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象。這種方法不僅節(jié)約時間，還可除去凝膠中可能帶有的微生物，排出膠粒內(nèi)的空氣。 (2)重復(fù)洗滌三次，如上清液仍有黃色，可增加洗滌次 數(shù)，否則無法清除血漿蛋白。 2． C [若在每種凝膠分離 范圍之外的分子，在不改變凝膠種類的情況下是 很難分離的。 ] 聯(lián)想 凝膠色譜法是根據(jù)相對分 子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對分子質(zhì)量很小，能進入分子篩的全部孔隙，運動速度最慢，路程最長；相對分子質(zhì)量較大的，不能進入凝膠顆粒內(nèi)，運動速度最快，路程最短。 ① 透析的目的是 _____________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________； ② 透析的原理是 _____________________________________________________________ ________________________________________ ________________________________。 (4)你如何知道紅細胞已洗滌干凈？ ________________________________________________________________________。 (2)實驗前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，取血回來，馬上進行離心，收集血紅蛋白溶液。 (2)自己制作凝膠色譜柱時，在色譜柱底部 d 位置相當(dāng)于多孔板的結(jié)構(gòu)可由__________________________替代。 五、蛋白質(zhì)純度鑒定及實驗結(jié)果分析與評價 1．純度鑒定 ——________________________________ 判斷純化的蛋白質(zhì)是否達到要求，需要進行蛋白質(zhì)純度的鑒定。 2．凝膠色譜柱的裝填 (1)計算：根據(jù)色譜柱的內(nèi)體積計算所需凝膠量 ↓ (2)凝膠 ________：凝膠用蒸餾水充分溶脹后，配成凝膠懸液 ↓ ( 3)________：將色譜柱垂直 固定在支架上 ↓ (4)________：將凝膠懸液一次 性裝填入色譜柱內(nèi) ↓ (5)________：用 20 mmol/L 的磷酸緩沖液 (pH＝ )洗滌平衡凝膠 12 h，使凝膠裝填緊密 3．樣品的加入和洗脫 (1)調(diào)整緩沖液面：打開色譜柱下端的流出口，調(diào)整緩沖液與凝膠面 ________ (2)________透析樣品：關(guān)閉下端出口，用吸管小心將 1 mL 樣品加到色譜柱頂端 (3)樣品滲入凝膠床：加樣后打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi) (4)再調(diào)整 ________：關(guān)閉出口，小心加入 20 mmol/L 的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度 (5)________：打開下端出口，用磷酸緩沖液洗脫 (6)收集：待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時，用試管收集流出液，每 5 mL 收集一管，連續(xù)收集 四、實驗操作提示 1．紅細胞的洗滌： ________________________________。 三、純化蛋白質(zhì) 1．凝膠色譜柱的制作 (1)取長 40 cm，內(nèi)徑為 cm 的 ________，兩端需用砂紙磨平。 4．粗分離 ——透析 (1)原理： ______能使小分子自由進出，而將大分子保留在袋內(nèi)。 ② 將離心管中的液體部分用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層。 2．血紅蛋白的 ____ (1)方法：將洗滌好的紅細胞倒入燒杯中，加 ______到原血液的體積，再加 40%體積的______，置于磁力攪拌器上充分攪拌 10 min。 (
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