高中生物專題5第18課時血紅蛋白的提取和分離同步課時作業(yè)新人教版選修1-文庫吧資料
2024-12-13 06:17本頁面
【正文】 主要是由血紅蛋白完成，血紅蛋白的主要功能是攜帶 O2或 CO2，我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液進行實驗，來提取和分離血紅蛋白，請回答下列有關問題： (1)血紅蛋白提取和分離的過程可分為四步： __________、 ________、 ________和________。 (3)裝填凝膠色譜柱時，色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，原因是 __________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。據(jù)圖回答問題： (1)a、 b 均為蛋白質(zhì)分子，其中先從層析柱中洗脫出來的是 ________，原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。鑒定的方法中，使用最多的是 SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳。 4．色譜柱成功的標志： ________________________。 2．凝膠的預處理： _________________________________________________________。 (4)將上述三部分按相應位置組裝成一個整體。 (2)柱底部制作：打孔 → 挖出 ________→ 安裝移液管頭部 → 覆蓋尼龍網(wǎng)，再用 100 目尼龍紗將 ________上部包好。 ② 用于更換樣品的緩沖液。 (2)過程：取 1 mL 的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有 300 mL的物質(zhì)的量濃度為 20 mmol/L 的磷酸緩沖液中 (pH 為 )，透析 12 h。 (3)離心后試管中的溶液分為 4 層，最上面的一層是甲苯層，第二層是脂溶性物質(zhì)沉淀層，第三層是血紅蛋白水溶液層，最下層是雜質(zhì)沉淀層。 ③ 將濾液置于分液漏斗中，靜止片刻后，分出下層的紅色透明液體，即為血紅蛋白溶液。 3．分離血紅蛋白溶液 (1)方法 ① 將攪拌好的混合液轉(zhuǎn)移到 __________中，以 2 000 r/min 的速度 ____10 min。 (2)目的：使紅細胞吸水 ____，血紅蛋白釋放出來。 (2)過程 ① 采集血樣 ：為防止血液凝固，需在采血器中加入抗凝血劑檸檬酸鈉 ② 低速短時 ： 500 r/min，離心 2 min，這樣做的目的是防止紅細胞與白細胞一同沉淀，達不到分離效果 ③ 吸去 ：用膠頭吸管吸去上層黃色血漿 ④ 生理鹽水 ：向盛有暗紅色紅細胞液體的燒杯中加入五倍體積的生理鹽水，緩緩攪拌 10 min ⑤ 低速短時離心 ⑥ 重復 ③④ 步驟三次 ：直至上清液中沒有黃色，表明紅細胞已經(jīng)洗滌干凈，否則需重復洗滌 (3)操作提示：洗滌次數(shù)、離心速度與離心時間十分重要，洗滌次數(shù)少，無法除去血漿蛋白，離心速度過高和時間過長會使白細胞等一同沉淀，達不到分離效果。 ② ________________電泳 加入 SD S 作用：使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性，解聚成單條肽鏈；與各種蛋白質(zhì)結合形成蛋白質(zhì) —SDS 復合物， SDS 所帶負電荷的量遠遠超過 了蛋白質(zhì)原有的電荷量，因而掩蓋了不同蛋白質(zhì)間的電荷差別，使電泳遷移率完全取決于分子的大小。 (2)原理 在同一電場下， 由于各種分子 ________性質(zhì)的差異及分子本身 ________、 __ ______的不同，使帶電分子產(chǎn)生 ________________，從而實現(xiàn)樣品中各種分子 的分離。許多重要的生物大分子，如 ________、 ________等都具有可解離的基團，在一定的 pH 下，這些基團會帶上________或 ________。H 2O—NH4Cl。 ② 多元弱酸的酸式鹽及其對應的次級鹽，如 NaHCO3—Na2CO3， NaH2PO4—Na2HPO4。然 而， 1 滴濃鹽酸加入到 1 L CH3COOH—CH3COONa 混合溶液或 NaH2PO4—Na2HPO4混合溶液中， [H＋ ]的增加不到百分之一 (從 10－ 7 mol/L 增到 10－ 7 mol/L)， pH 沒有明顯變化。 相對分子質(zhì)量 直徑大小 運動方式 運動速度 運動路程 洗
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