高中生物同步課件：53血紅蛋白的提取和分離2人教版選修1-文庫(kù)吧資料
2024-11-25 07:19本頁(yè)面
【正文】 膠面平齊，關(guān)閉出口。 注意： 液面不要低于凝膠表面，否則可能有氣泡混入，影響液體在柱內(nèi)的流動(dòng)與最終生物大分子物質(zhì)的分離效果。 裝填凝膠柱時(shí)不得有氣泡存在： 因?yàn)闅馀輹?huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果 。 B、裝填：將凝膠懸浮液一次性緩慢倒入色譜柱內(nèi)，裝填時(shí)輕輕敲動(dòng)色譜柱，使凝膠填裝均勻。 ② 凝膠的前處理： 配置凝膠懸浮液：計(jì)算并稱取一定量的凝膠浸泡于蒸餾水或洗脫液中充分溶脹后，配成凝膠懸浮液。 B、代表意義 ： “ G” 表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分離范圍 。 ⑤安裝其他附屬結(jié)構(gòu)。③ 頂塞的制作： 打孔 → 安裝玻璃管 。 ②底塞的制作： 打孔 → 挖出凹穴 → 安裝移液管頭部 → 覆蓋尼龍網(wǎng)，再用 100目尼龍紗包好，插到玻璃管的 一 端 。 ②透析目的： 除去樣品中分子量較小的雜質(zhì)。 ③分離： 用濾紙過(guò)濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的 紅色透明液體。 (3)分離血紅蛋白溶液： ① 過(guò)程： 將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以 2020r/min的速度離心 10 min。 低速離心（低速短時(shí)間）重復(fù) 5步驟三次，直至上清液中已沒(méi)有黃色，表明洗滌干凈。 低速短時(shí)間離心（速度越高和時(shí)間越長(zhǎng)，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果） 吸取血漿：上層透明的黃色血漿。 (1)紅細(xì)胞的洗滌 : ① 洗滌目的 : 去除雜蛋白，以利于后續(xù)血紅蛋白的 分離純化，洗滌次數(shù)不可過(guò)少。 市場(chǎng)上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售。因而掩蓋了 不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別 ， 使電泳遷移率完全取決于分子的大小。 由幾條肽鏈組成的 蛋白質(zhì)復(fù)合體 在 SDS的作用下會(huì) 解聚成單條肽鏈 ，因此測(cè)定的結(jié)果只是 單條肽鏈的分子量 。 （ SDS的作用） 為了消除 凈電荷對(duì)遷移率的影響， 可以在凝膠中加入 SDS。聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N’ 亞甲基雙丙烯酰胺在 引發(fā)劑 和 催化劑 的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。 : 瓊脂糖 凝膠電泳、 聚丙稀酰胺 凝膠電泳。 ②在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。 ： 在本課題中使用的緩沖液是 :__________ , 其目的是 : 利用緩沖液模擬細(xì)胞內(nèi)的 PH環(huán)境，保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察 (紅色 )和科學(xué)研究 (活性 ) 磷酸緩沖液 （三） 電泳： ： 帶電粒子在電場(chǎng)作用下發(fā)生遷移的過(guò)程。 : : 通常由 1－ 2 種緩沖劑 溶解于水中配制而成。 分離蛋白質(zhì) 的原理和 具體過(guò)程 （二）緩沖溶液 : 在一定的范圍內(nèi)，凡是能夠抵制 外加少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿 的影響使原來(lái)溶液 PH值基本保持 不變的混合溶液。相對(duì)分子質(zhì)量不同的
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