20xx人教版高中生物選修一5-3血紅蛋白的提取和分離ppt同步課件-文庫(kù)吧資料
2024-11-24 22:30本頁(yè)面
【正文】 洗滌次數(shù)少，未能除去血漿蛋白離心速度過(guò)高或時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 凝膠色譜 柱的裝填 ① 放一支與凝膠柱垂直的日光燈 → 直接檢查凝膠是否裝填得均勻 ② 加入大分子有色物質(zhì)如藍(lán)色葡聚糖－ 2 000 或紅色葡聚糖，若色帶均勻、狹窄、平整 → 裝填成功 血紅蛋白 的分離 ① 血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨洗脫液緩慢流出 → 分離成功 ② 血紅蛋白的紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬 → 分離效果不好，可能與凝膠色譜柱的裝填有關(guān) 特別提醒 SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量，是根據(jù)大多數(shù)蛋白質(zhì)都能與陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉(SDS)按重量比結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)分子所帶的負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)天然蛋白質(zhì)分子的負(fù)電荷，消除了不同蛋白質(zhì)分子的電荷效應(yīng)，使蛋白質(zhì)分子相對(duì)遷移率的大小完全取決于相對(duì)分子質(zhì)量的高低，因此可從已知相對(duì)分子質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的對(duì)數(shù)和相對(duì)遷移率所作的標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出供試品的相對(duì)分子質(zhì)量。 2．凝膠色譜操作 3． 純度鑒定 ——SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳 判 斷純化的蛋白質(zhì)是否達(dá)到要求 ， 需要進(jìn)行蛋白質(zhì)純度的鑒定 。 ② 過(guò)程：取 1 mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中 ， 將透析袋放入盛有 300 mL的物質(zhì)的量濃度為 20 mmol/L的磷酸緩沖液中 (pH為 )，透析 12 h。 ③ 目的：經(jīng)過(guò)離心使血紅蛋白和其他雜質(zhì)分離開(kāi)來(lái) ， 便于下一步對(duì)血紅蛋白的純化 。 (3)分離血紅蛋白溶液 ① 將混合液進(jìn)行離心后 ， 會(huì)明顯看到試管中的溶液的分層情況 (從上往下 )：第 1層：無(wú)色透明的甲苯層；第 2層：脂溶性物質(zhì)的沉淀層 ——白色薄層固體；第 3層：血紅蛋白的水溶液 ——紅色透明液體；第 4層：其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物 。 ② 方法 a． 采集血樣 → → → → e.低速離心 → 重復(fù) d、 e步驟三次 。 氣泡 洗脫次序 紅色區(qū)帶均勻一致地移動(dòng) [思維激活 2] 透 析的目的是什么 ？ 依據(jù)了什么原理 ？ 提示 透析的目的在于去除血紅蛋白溶液中相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì) ， 透析依據(jù)的原理是半透膜只允許小分子透過(guò) ， 不允許大分子透過(guò) 。 因其能攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的 ， 降低分離效果 。 (2)色譜柱填料的處理 商品凝膠使用前需直接放在 中膨脹 ， 可以將加入其中的濕凝膠 ， 加速膨脹 。 磷酸緩沖液 色譜柱 加入和洗脫 4． 操作提示 (1)紅 細(xì)胞的洗滌 、 與 十分重要 。 (2)凝膠色譜柱的裝填 。 蒸餾水 甲苯 漲破 離心管 離心 (4)透析 取 1 mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中 ， 將透析袋放入盛有 300 mL的物質(zhì)的量濃度為 20 mmol/L的 中 (pH為 )， 透析 12 h(以除去樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì) )。 (3)分離血紅蛋白溶液 將攪拌好的混合液轉(zhuǎn)移到 中 ， 以 2 000 r/min的速度 10 min。 目的是 ， 以利于后續(xù)步驟的分離純化 。 答案 B 1． 蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步 ： 、 、 和
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