高中生物同步課件：53血紅蛋白的提取和分離2人教版選修1-在線瀏覽
2025-01-20 07:19本頁面
【正文】 定 未知蛋白質(zhì) 的分子量。 二、實(shí)驗(yàn)操作 樣品處理 → 粗分離 → 純化 → 純度鑒定 ： （一）蛋白質(zhì)提取和分離步驟 （二）操作過程 本課題可選用豬、牛、羊或其他脊椎 動(dòng)物的血液來分離血紅蛋白。 ② 洗滌操作： 采集血樣。 鹽水洗滌：用五倍體積的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為％的氯化鈉溶液洗滌。 (2)血紅蛋白的釋放： 加蒸餾水到 原血液體積 ， 再加40％體積的 甲苯 ，置于 磁力攪拌器 上充分?jǐn)嚢?10分鐘（加速細(xì)胞破裂） ,細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。 ②試管中溶液層次： 第 1層（最上層）：甲苯層（ 無色透明 ）；第 2層（ 中上層 ）：脂溶性物質(zhì)沉淀層（ 白色薄層固體）； 第 3層（中下層）：血紅蛋白的水溶液層（ 紅色透明液體 ）；第4層（最下層）：雜質(zhì)沉淀層（ 暗紅色 ）。 甲苯層（無色透明） 白色薄層固體 紅色透明液體 雜質(zhì)沉淀層（暗紅色） 試管中溶液層次 (4)透 析： ① 過程： 取 1ml的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有 300ml的物質(zhì)的量濃度為 20mmol/l的磷酸緩沖液中（ pH為 ），透析 12小時(shí)。 透析過程動(dòng)畫演示 : （ 1）凝膠色譜柱的制作： ① 取長 40厘米，內(nèi)徑 ， 兩端需用砂紙磨平。 注意事項(xiàng) ：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否則難以鋪實(shí)尼龍網(wǎng)，還會(huì)導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。④組裝： 將上述三者按相應(yīng)位置組裝成一個(gè)整體 。 （ 2）凝膠色譜柱的裝填 ① 凝膠的選擇： A、材料： 交聯(lián)葡聚糖凝膠（ G75）。 75表示凝膠的得水值，即每克凝膠膨脹時(shí)吸水 。 ③ 凝膠色譜柱的裝填方法： A、固定：將色譜柱裝置固定在支架上。注意： 凝膠裝填時(shí)盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。 ④ 洗滌平衡： 裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在50cm高的操作壓下，用 300ml的 20mmol/l的 磷酸緩沖液（ pH為 ） 充分洗滌平衡 12小時(shí)。 不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象 。 ②滴加透析樣品： 吸管吸 1ml樣品加到色譜柱的頂端，滴加樣品時(shí)，吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動(dòng)加樣，同時(shí)注意不要破壞凝膠面。 ④洗脫： 小心加入 pH= 的 20mmol/l的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度，連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口進(jìn)行洗脫。（在分離過程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動(dòng)，說明色譜柱制作成功） ⑥ 注意： 正確的加樣操作： 不要觸及并破壞凝膠面。 使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動(dòng)。貼壁加樣。 思考下面的問題： 讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的 pH范圍內(nèi)，維持結(jié)構(gòu)和功能正常。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實(shí)驗(yàn)操作。 首先通過洗滌紅細(xì)胞、血
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