血紅蛋白的提取和分離(第1課時)-文庫吧資料
2024-08-29 01:36本頁面
【正文】 一步是 A 弄清各種蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu) B 弄清各種蛋白質(zhì)的功能 C 弄清各種蛋白質(zhì)的合成過程 D 獲得高純度的蛋白質(zhì) 用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的過程中，關(guān)于蛋白質(zhì)的敘述，正確的是 A 相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程大于相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì) B 相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程小于相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì) C 相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程等于相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì) D 二者根本無法比較 : （ 1）凝膠色譜柱的制作： ① 取長 40厘米，內(nèi)徑 ， 兩端需用砂紙磨平。 (4)透析： (粗分離 ) ①過程： 取 1ml的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有 300ml的物質(zhì)的量濃度為 20mmol/l的磷酸緩沖液 中（ pH為 ），透析 12小時 。 ②試管中溶液層次： 第 1層（最上層）：甲苯層（ 無色透明 ）；第 2層（ 中上層 ）：脂溶性物質(zhì)沉淀層（ 白色薄層固體）； 第 3層（中下層）：血紅蛋白的水溶液層（ 紅色透明液體 ）；第 4層（最下層）：雜質(zhì)沉淀層（ 暗紅色 ）。 (2)血紅蛋白的釋放： 加蒸餾水到 原血液體積 ， 再加40％體積的 甲苯 ，置于 磁力攪拌器 上充分攪拌 10分鐘（加速細胞破裂） ,細胞破裂釋放出血紅蛋白。 鹽水洗滌：用五倍體積的質(zhì)量分數(shù)為％的氯化鈉溶液洗滌。 ② 洗滌操作： 采集血樣。 二、實驗操作 樣品處理 → 粗分離 → 純化 → 純度鑒定 ： （一）蛋白質(zhì)提取和分離步驟 （二）操作過程 本課題可選用豬、牛、羊或其他脊椎 動物的血液來分離血紅蛋白 。 市場上有高分子量、次高分子量及低分子量的標準蛋白試劑出售。因而掩蓋了 不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別 ， 使電泳遷移率完全取決于分子的大小。 由幾條肽鏈組成的 蛋白質(zhì)復(fù)合體 在 SDS的作用下會 解聚成單條肽鏈 ，因此測定的結(jié)果只是 單條肽鏈的分子量 。 （ SDS的作用 ） 為了消除 凈電荷對遷移率的影響， 可以在凝膠中加入 SDS。聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N’ 亞甲基雙丙烯酰胺在 引發(fā)劑 和 催化劑 的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。 ： 瓊脂糖凝膠電泳 聚丙烯酰胺凝膠電泳 （三）電泳 陽極（+） 陰極（—） 帶正電的離子 帶負電的離子 電泳原理示意圖 帶電性質(zhì) 以及 分子大小，形狀的不同 分子遷移速度不同，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。 ② 在
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