高中生物同步課件：53血紅蛋白的提取和分離7人教版選修1-文庫吧資料
2024-11-25 07:20本頁面
【正文】 色譜柱的制作： ① 取長 40厘米，內(nèi)徑 ， 兩端磨平。 甲苯層 （ 無色透明） 白色薄層固體 紅色透明液體 雜質(zhì)沉淀層 （ 暗紅色 ） 試管中溶液層次 (4)透 析： ① 過程： 取 1ml的血紅蛋白溶液 裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300ml的 20mmol/l的磷酸緩沖液 中（ pH為 ），透析 12h ② 目的： 除去樣品中分子量較小的雜質(zhì)和離子。 ② 試管中溶液層次： 第 1層（最上層）： 甲苯層 （無色透明）； 第 2層（中上層）： 脂溶性物質(zhì)沉淀層 （白色薄層固體）； 第 3層（中下層）： 血紅蛋白的水溶液層 （紅色透明液體）； 第 4層（最下層）： 雜質(zhì)沉淀層 （暗紅色）。 ① 目的 : ② 操作： 洗滌次數(shù)過少 ,無法除去血漿蛋白。 血紅蛋白的特點： (1)紅細(xì)胞的洗滌 : 去除雜質(zhì)蛋白，利于后續(xù)血紅蛋白的分離純化 . 采集血樣 低速短時間離心 （速度越高和時間越長，會使白細(xì) 胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果） 吸取血漿： 上層透明的黃色血漿。 血液 血漿 水 分 固體物質(zhì)： 血漿蛋白、 無機(jī)鹽、磷脂、葡萄糖等 血細(xì)胞 白細(xì)胞 血小板 紅細(xì)胞 （最多） 血紅蛋白 （ 90％） 兩個 α －肽鏈 兩個 β 一肽鏈 四個亞鐵血紅素基團(tuán) ： 血液有哪些成分？ ： 用雞的紅細(xì)胞提取 DNA，用豬、牛、羊的紅細(xì)胞提取血紅蛋白的原因是什么？ 雞的紅細(xì)胞具有細(xì)胞核，含有 DNA，便于進(jìn)行 DNA的提取；人的紅細(xì)胞無細(xì)胞核，結(jié)構(gòu)簡單，血紅蛋白含量豐富，便于提取血紅蛋白。 市場上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售。因而 掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別， 使 電泳遷移率完全取決于分子的大小 。解聚成單條肽鏈 ，因此測定的結(jié)果只是 單條肽鏈的分子量 。 N,N’亞甲基雙丙烯酰胺（形成交聯(lián)） 丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N’亞甲基雙丙烯酰胺的交聯(lián)共聚反應(yīng) 蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的 遷移率 取決 于它所帶 凈電荷的多少 以及 分子的大小 等因素。 在 電場 的作用下， 這 些 帶電 分子 會 向著 與 其所 帶電 荷相反的 電極 移 動 瓊脂糖凝膠電泳示意圖 聚丙烯酰胺凝膠電泳 測定蛋白質(zhì)分子量 :常用 十二烷基硫酸鈉（ SDS） — 聚丙烯酰胺 凝膠電泳。 ③ 分離樣品中各種分子 帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小，形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度， 從而實現(xiàn)樣品
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