高中生物同步課件：53血紅蛋白的提取和分離7人教版選修1-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 分離。 主要概念： ① 凝膠色譜法 ② 電泳法 ③ 緩沖溶液 ④ 它們?cè)谘t蛋白的提取中分別起到什么作用。 ③ 依據(jù)的特性是： 蛋白質(zhì)分子量的大小。 ② 在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷 相反 的電極移動(dòng)。SDS能與各種蛋白質(zhì)形成 蛋白質(zhì) — SDS復(fù)合物 ，SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子 原有的電荷量 。 鹽水洗滌： 下層暗紅色的紅細(xì)胞 +五倍體積的 ％ 的 NaCl溶液洗滌，攪拌 10min 低速 短時(shí)間 離心： 重復(fù) 5步驟三次 上清液中已沒(méi)有黃色：紅細(xì)胞洗滌干凈。 ② 底塞的制作： 打孔 → 挖出凹穴 → 安裝移液管頭部 → 覆蓋尼龍網(wǎng)，再用100目尼龍紗包好，插到玻璃管的 一 端 。 ② 凝膠的前處理： 配置凝膠懸浮液： 計(jì)算并稱(chēng)取一定量的凝膠浸泡于 蒸餾水或洗脫液 中 充分溶脹后，配成 凝膠懸浮液。 ⑤ 收集： 待 紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端 時(shí)，用試管收集流出 液，每 5ml收集一試管，連續(xù)收集 。 樣品的處理： 通過(guò)洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、 離心等操作收集到 血紅蛋白溶液 ， 樣品的粗分離 :透析 → 去除分子量較小的雜質(zhì) 樣品的純化： 凝膠色譜法 → 除去 相對(duì)分子質(zhì)量較大 的 雜質(zhì)蛋白 純度鑒定 :聚丙烯酰胺凝膠電泳 進(jìn)行純度鑒定。 紅色區(qū)帶：均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出；說(shuō)明凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確 紅色區(qū)帶：歪曲、散亂、變寬， 說(shuō)明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 你是否完成了對(duì)血液樣品的處理？你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些變化嗎？ 你裝填的凝膠色譜柱是否有氣泡產(chǎn)生？你的色譜柱裝填得成功嗎？你是如何判斷的？ 由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以 在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。 思考下面的問(wèn)題： 讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的 pH范圍內(nèi)，維持結(jié)構(gòu)和功能正常。 ④ 洗滌平衡： 連接緩沖液洗脫瓶，在 50cm高的操作壓下，用 300ml的 20mmol/L的磷酸緩沖液（ pH為 ） 充分洗滌平衡 12h。 ⑤ 安裝其他附屬結(jié)構(gòu)。 ③ 分離 ： 濾紙過(guò)濾：除去脂溶性沉淀層， 分液漏斗中靜置：分出下層的 紅色透明液體 。 二、實(shí)驗(yàn)操作 樣品處理 → 粗分離 → 純化 → 純度鑒定 ： （一）蛋白質(zhì)提取和分離步驟 （二）操作過(guò)程
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