高中生物專題5第18課時血紅蛋白的提取和分離同步課時作業(yè)新人教版選修1-展示頁
2024-12-17 06:17本頁面
【正文】 脫 次序 大 ____凝膠顆?？障吨睆剑慌抛柙?____ 垂直向下移動 ____ 較短 先從凝膠柱洗脫出來 小 ____凝膠顆?？障吨睆?，可以進(jìn)入顆粒內(nèi)部 垂直向下移動，無規(guī)則 擴(kuò)散進(jìn)入凝膠顆粒 ____ 較長 后從凝膠柱洗脫出來 (1)作用 在一定范圍內(nèi)，緩沖溶液能夠抵制外界 ________和 ________對溶液 ________的影響，維持 pH 基本不變。 。 第 18 課時 血紅蛋白的提取和分離 目標(biāo)導(dǎo)航 、電泳法等分離生物大分子的基本原理。 和作用機(jī)理。 一、分離蛋白質(zhì)的基本方法原理 1．蛋白質(zhì)的分離方法 ——凝膠色譜法 凝膠色譜法也稱做 ________________，是根據(jù) ________________的大小分離 ________的有效方法。 純水的 pH 因加入少量的強(qiáng)酸或強(qiáng)堿而發(fā)生很大變化。 (2)組成 緩沖溶液通常由 ________種緩沖劑溶解于水中配制而成，調(diào)節(jié)緩沖劑的 ____________就可以制得 ________________________的緩沖液，其類型主要有 3 種： ① 弱酸及其對應(yīng)鹽，如 CH 3COOH—CH3COONa， H2CO3—NaHCO3。 ③ 弱堿及其對應(yīng)鹽 ， 如 NH3 3． 電泳 (1)概念 電泳是指 ____________在 ________的作用下發(fā)生 ________的過程。在電場的作用下，這些帶電分子會向著 ________________的電極移動。 (3)常用方法 ① ____________電泳：由于瓊脂糖本身不帶電荷，所以，各種分子在電場中的遷移速率因各種分子帶電性質(zhì)的差異、分子大小和形狀不同而不同，從而得以分離。 二、粗提取血紅蛋白 1．紅細(xì)胞的洗滌 (1)目的： ____________，以利于后續(xù)步驟的分離純化。 2．血紅蛋白的 ____ (1)方法：將洗滌好的紅細(xì)胞倒入燒杯中，加 ______到原血液的體積，再加 40%體積的______，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢?10 min。 (3)原理：滲透作用。 ② 將離心管中的液體部分用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層。 (2)目的：使 ________與大部分雜質(zhì)分離開，便于后續(xù)純化。 4．粗分離 ——透析 (1)原理： ______能使小分子自由進(jìn)出，而將大分子保留在袋內(nèi)。 (3)目的 ① 除去樣品中相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)。 三、純化蛋白質(zhì) 1．凝膠色譜柱的制作 (1)取長 40 cm，內(nèi)徑為 cm 的 ________，兩端需用砂紙磨平。 (3)柱頂部制作：打孔 → 安裝玻璃管。 2．凝膠色譜柱的裝填 (1)計算：根據(jù)色譜柱的內(nèi)體積計算所需凝膠量 ↓ (2)凝膠 ________：凝膠用蒸餾水充分溶脹后，配成凝膠懸液 ↓ ( 3)________：將色譜柱垂直 固定在支架上 ↓ (4)________：將凝膠懸液一次 性裝填入色譜柱內(nèi) ↓ (5)________：用 20 mmol/L 的磷酸緩沖液 (pH＝ )洗滌平衡凝膠 12 h，使凝膠裝填緊密 3．樣品的加入和洗脫 (1)調(diào)整緩沖液面：打開色譜柱下端的流出口，調(diào)整緩沖液與凝膠面 ________ (2)________透析樣品：關(guān)閉下端出口，用吸管小心將 1 mL 樣品加到色譜柱頂端 (3)樣品滲入凝膠床：加樣后打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi) (4)再調(diào)整 ________：關(guān)閉出口，小心加入 20 mmol/L 的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度 (5)________：打開下端出口，用磷酸緩沖液洗脫 (6)收集：待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時，用試管收集流出液，每 5 mL 收集一管，連續(xù)收集 四、實驗操作提示 1．紅細(xì)胞的洗滌： ________________________________。 3．色譜柱的裝填： ___________________________________________________________。 五、蛋白質(zhì)純度鑒定及實驗結(jié)果分析與評價 1．純度鑒定 ——________________________________ 判斷純化的蛋白質(zhì)是否達(dá)到要求，需要進(jìn)行蛋白質(zhì)純度的鑒定。 2．結(jié)果分析與評價 項目 分析 血液樣 品的處理 分層 ____→ 樣品處理完成 分層不明顯的原因 ????? 洗滌次數(shù)少，未能除去血漿蛋白離心速度過高和時間過長 凝膠色譜柱的裝填 放一個與凝膠柱垂直的日光燈 → 直接檢查； 加入大分子有色物質(zhì)如藍(lán)色葡聚糖或紅色
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