高中生物課件53血紅蛋白的提取和分離-展示頁
2025-01-17 13:09本頁面
【正文】 均勻 。 退出 目錄 二、凝膠色譜法的實驗操作 1 .蛋白質(zhì)的提取和分離步驟 ( 1 ) 樣品處理 紅細胞洗滌 目的 : 去除雜蛋白方法 : 低速短時間離心結(jié)果 : 直至上清液不再呈現(xiàn) 黃色 血紅蛋白的釋放 : 紅細胞在 蒸餾水 和 甲 苯 作用下破裂 , 釋放出血紅蛋白 退出 目錄 分離血紅蛋白溶液 : 混合液離心 → 過濾去除 脂溶性沉淀層 → 用分液漏斗分離 ( 2 ) 粗分離 : 透析 方法 : 將血紅蛋白溶液裝入 透析袋 中 , 將 透析袋 放入一定量適宜濃 度的 磷酸緩沖液 ( pH 為 7 . 0 ) 中 , 透析 12 h目的 : 除去 樣品中相對分子質(zhì)量較小 的雜質(zhì) 退出 目錄 ( 3 ) 純化 : 凝膠色譜 法。 預習交流 1 —— 緩沖溶液的成分是怎樣的 ? 緩沖溶液中含對酸堿起緩沖作用的緩沖對 ,每一緩沖對均由弱酸和相應的強堿鹽組成。調(diào)節(jié) 緩沖劑的使用比例 , 可配制不同 pH 的緩沖液。其中后者使用時通常加入帶負電荷多的 SDS , 形成 “ 蛋白質(zhì) SDS 復合物 ” , 使蛋白質(zhì)遷移速率僅取決于 分子的大小 。 ② 原理 : 利用了待分離樣品中各種分子的 帶電性質(zhì)的差異 、 分子本身的大小 以及形狀的不同 , 使帶電分子在電場中產(chǎn)生不同的 遷移速度 ,從而分離樣品中的各種分子。 ② 過程及原理 a. 凝膠 形態(tài) : 微小的 多孔球體組成 : 大多數(shù)由 多糖類化合物 構(gòu)成結(jié)構(gòu) : 內(nèi)部有許多 貫穿的通道 退出 目錄 b. 分離的過程 項目內(nèi)容蛋白質(zhì)類型 進入凝膠 內(nèi)部通道 的程度 路程 移動 速度 結(jié)果 相對分子 質(zhì)量較小 容易進入 較長 較慢 使相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子得以分離 相對分子 質(zhì)量較大 無法進入 較短 較快 退出 目錄 c. 分離原理 : 依據(jù) 相對分子質(zhì)量的不同 而將蛋白質(zhì)分離。 色譜柱填料的處理和色譜柱的裝填。 重點 : 凝膠色譜法的原理和方法。退出 目錄 課題 3 血紅蛋白的提取和分離 退出 目錄 課前 預習導學 目標 導航 學習目標 重點難點 1 . 說出色譜法、電泳法等分離生物大分子的基本原理。 2 . 用流程圖表示并體驗血紅蛋白的提取和分離過程。 難點 : 樣品的預處理 。 退出 目錄 預習 導引 一、分離蛋白質(zhì)的原理與方法 1 .分離蛋白質(zhì)的原理 蛋白質(zhì)特 性的差異 分子的 形狀和大小所帶 電荷 的性質(zhì)和多少溶解度吸附性質(zhì)對其他分子的 親和力 退出 目錄 2. 分離蛋白質(zhì)的方法 ( 1 ) 凝膠色譜法 ① 概念 : 根據(jù) 相對分子質(zhì)量的大小 分離蛋白質(zhì)的有效方法 , 也叫 分配色譜法 。 ( 2 ) 電泳法
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