血紅蛋白的提取和分離-展示頁
2025-06-04 18:25本頁面
【正文】 慢 D．路程較短，移動(dòng)速度較快 D 具體過程 一、基礎(chǔ)知識 蛋白質(zhì)分離和提取的原理 ?相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的進(jìn)行過程可表示為圖中哪一個(gè) ?B 概念： 在一定的范圍內(nèi)，能對抗外來少量強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或稍加稀釋不引起溶液 PH發(fā)生明顯變化的作用叫做緩沖作用，具有緩沖作用的溶液叫做緩沖溶液。 ㈡ 緩沖溶液： 作用： 能夠抵制（ ）對溶液（ ）的影響，維持 PH基本不變。調(diào)節(jié)緩沖劑的（ ）就可以制得（ ）使用的緩沖液。 NaH2PO4 / Na2HPO4 H2CO3 / NaHCO3 磷酸緩沖液， 保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察 (紅色 )和科學(xué)研究其 (活性 ) 在本課題中使用的緩沖液？ （三） 電泳： ： 帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程。 ②在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。 : 瓊脂糖 凝膠電泳、 聚丙稀酰胺 凝膠電泳。 蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的 遷移率 取決于它所帶 凈電荷 的多少以及 分子的大小 等因素。 （ 2）原理： SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。 SDS能與各種蛋白質(zhì)形成 蛋白質(zhì) — SDS復(fù)合物 ， SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子 原有電荷量 。 （ 3） SDS聚丙稀酰胺凝膠電泳 作用機(jī)理 : 聚丙稀酰胺凝膠電泳 使用 SDS聚丙烯酰胺電泳過程中，不同蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于 A 電荷的多少 B 分子的大小 C 肽鏈的多少 D 分子形狀的差異 蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步： （ 1）樣品處理：包括洗滌紅細(xì)胞；血紅蛋白稀釋；離心等操作收集到的血紅蛋白溶液。 （ 3）純化：通過凝膠色譜法將分子量較大的雜質(zhì)蛋白質(zhì)除去。 二、實(shí)驗(yàn)操作： 樣品處理 → 粗分離 → 純化 → 純度鑒定 血液 血漿 水 分 其他物質(zhì)： 血漿蛋白、 無機(jī)鹽、磷脂、葡萄糖等 血細(xì) 胞 白細(xì)胞 血小板 紅細(xì)胞 （最多） 血紅蛋白 （ 90％） 兩個(gè) α －肽鏈 兩個(gè) β 一肽鏈 四個(gè)亞鐵紅素基團(tuán) 1. 血液有哪些成分？ 2. 你認(rèn)為鳥類血液和哺乳動(dòng)物血液中，最好哪種血液來提取血紅蛋白？為什么？ 二、實(shí)驗(yàn)操作： 樣品處理 → 粗分離 → 純化 → 純度鑒定 知識回顧 （一）樣品處理 紅細(xì)胞的洗滌： 血紅蛋白的釋放： 分離血紅蛋白溶液： 透析 ：（ 如何除無機(jī)鹽離子和小分子有機(jī)物質(zhì)呢？） 血液＋檸檬酸鈉 → 低速短時(shí)離心 → 吸出上層血漿 → 紅細(xì)胞＋ 5倍體積生理鹽水 → 緩慢攪拌 10min→ 低速短時(shí)離心 → 吸出上清液→ 反復(fù)洗滌直至上清液無黃色 在蒸餾水和甲
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