血紅蛋白的提取和分離-資料下載頁
2025-05-26 18:25本頁面
【正文】 緩沖溶液 組 成 作 用緩沖溶液 組 成 作 用蛋白質(zhì)的提取分離樣品處理 粗 分 離純 化純度鑒定蛋白質(zhì)的提取分離樣品處理 粗 分 離純 化純度鑒定 觀察你處理的血液樣品離心后 是否分層 （見教科書圖 518）， 如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。 此外，離心速度過高和時(shí)間過長，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評價(jià) 你是否完成了對血液樣品的處理？你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些變化嗎？ 你裝填的凝膠色譜柱是否有氣泡產(chǎn)生？你的色譜柱裝填得成功嗎？你是如何判斷的？ 由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。此外，還可以加入大分子的有色物質(zhì)， 例如藍(lán)色葡聚糖 — 2022或紅色葡聚糖，觀察色帶移動(dòng)的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。 如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時(shí)要重新裝柱。 如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出； 如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。 你能觀察到蛋白質(zhì)的分離過程中，紅色區(qū)帶的移動(dòng)嗎？請描述紅色區(qū)帶的移動(dòng)情況，并據(jù)此判斷分離效果？ 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評價(jià) 本課題作業(yè) 。 ? ?它的作用是什么 ? ? ? ,紅細(xì)胞有什么特點(diǎn) ?這一特點(diǎn)對你進(jìn)行 蛋白質(zhì)的分離有什么意義 ? （ 1）計(jì)算：根據(jù)色譜柱的內(nèi)體積計(jì)算所需凝膠量 （ 2）凝膠溶脹： 凝膠浸泡于蒸餾水充分溶脹后，配成凝膠懸浮液 （ 3）固定：將色譜柱裝置固定在支架上 （ 4）裝填：將凝膠懸浮液一次性的裝填入色譜柱內(nèi)，裝填時(shí)輕輕敲動(dòng)色譜柱，使凝膠填裝均勻。 （ 5）洗滌平衡： 裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在 50cm高的操作壓下，用300ml的 20mmol/l的 磷酸緩沖液（ pH為 ）充分洗滌平衡 12小時(shí) 。 裝填時(shí) 注意： 凝膠裝填時(shí)盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。 裝填凝膠柱時(shí)不得有氣泡存在： 因?yàn)闅馀輹?huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果 。 洗滌平衡時(shí) 注意： 液面不要低于凝膠表面，否則可能有氣泡混入，影響液體在柱內(nèi)的流動(dòng)與最終生物大分子物質(zhì)的分離效果。 不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象 。 凝膠色譜柱的裝填 用 SDS聚丙稀酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)分子量的方法 使用 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳 測定蛋白質(zhì)的分子量時(shí)，可選用一組 已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白 同時(shí)進(jìn)行電泳，根據(jù)已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的 電泳區(qū)帶位置 ，用 電泳遷移率和分子量的對數(shù)作標(biāo)準(zhǔn)曲線 ，可以測定 未知蛋白質(zhì) 的分子量。 市場上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售。
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