血紅蛋白的提取和分離(已修改)
2025-06-07 18:25 本頁面
【正文】 課題 3 血紅蛋白的提取和分離 主要內(nèi)容： 一、基礎(chǔ)知識(shí) 二、實(shí)驗(yàn)操作 一、基礎(chǔ)知識(shí) 蛋白質(zhì)分離和提取的原理 ㈠ 凝膠色譜法（分配色譜法） 凝膠： 一些微小多孔的球體（內(nèi)含許多貫穿的通道，由多糖類構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖） 概念： 根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法 原理： 分子量 大 小 直徑大小 大于 凝膠顆?？障吨睆剑蛔钃踉陬w粒的外面 小于 凝膠顆?？障吨睆?，可以進(jìn)入顆粒內(nèi)部 運(yùn)動(dòng)方式 垂直向下移動(dòng) 垂直向下移動(dòng)，無規(guī)則擴(kuò)散進(jìn)入顆粒內(nèi)部 運(yùn)動(dòng)速度 較快 較慢 運(yùn)動(dòng)路徑 較短 較長 洗脫次序 先從 凝膠柱洗脫出來 后從 凝膠柱洗脫出來 一、基礎(chǔ)知識(shí) 蛋白質(zhì)分離和提取的原理 ?用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)，分子量大的蛋白質(zhì) ?A．路程較長，移動(dòng)速度較慢 B．路程較長，移動(dòng)速度較快 ?C．路程較短，移動(dòng)速度較慢 D．路程較短，移動(dòng)速度較快 D 具體過程 一、基礎(chǔ)知識(shí) 蛋白質(zhì)分離和提取的原理 ?相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的進(jìn)行過程可表示為圖中哪一個(gè) ?B 概念： 在一定的范圍內(nèi)，能對(duì)抗外來少量強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或稍加稀釋不引起溶液 PH發(fā)生明顯變化的作用叫做緩沖作用，具有緩沖作用的溶液叫做緩沖溶液。 ㈡ 緩沖溶液： 作用： 能夠抵制（ ）對(duì)溶液（ ）的影響，維持 PH基本不變。 外界的酸或堿pH值 緩沖溶液的配制 通常由（ ）種緩沖劑溶解于水中配制而成。調(diào)節(jié)緩沖劑的（ ）就可以制得（ ）使用的緩沖液。 1－ 2 使用比例 在不同 PH范圍內(nèi) 思考：說出人體血液中緩沖液。 NaH2PO4 / Na2HPO4 H2CO3 / NaHCO3 磷酸緩沖液， 保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察 (紅色 )和科學(xué)研究其 (活性 ) 在本課題中使用的緩沖液？ （三） 電泳： ： 帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程。 ： ① 許多重要的生物大分子，如多肽、 核酸等都具有可解離的基團(tuán)，在一定的 PH下，這些基團(tuán)會(huì)帶上正電或負(fù)電。 ②在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。 ③電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小，形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。 : 瓊脂糖 凝膠電泳、 聚丙稀酰胺 凝膠電泳。 在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng) 瓊脂糖凝膠電泳示意圖 聚丙稀酰胺凝膠電泳 （ 1）聚丙稀酰胺凝膠： 是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N， 亞甲基雙丙烯酰胺在引發(fā)劑和催化劑的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀
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