凝膠層析分離血紅蛋白與魚精蛋白-資料下載頁
2025-05-26 03:38本頁面
【正文】 當(dāng) 0 Kd 1時(shí)， Ve = Vo + Kd*Vi即表明分子受到部分排阻 (B)。 樣品的量 洗脫體積 實(shí)驗(yàn)原理 由于 Hb（紅色，分子量 64500） 與二硝苯 魚精蛋白 （黃色，分子量 202212022）的分子量不同 ， 通過交聯(lián)葡聚糖凝膠 G50（ sephadex）層析柱用蒸餾水洗脫分離。從顏色不同可直接觀察到血紅蛋白洗脫較快，魚精蛋白洗脫較慢。 凝膠層析分離血紅蛋白 與魚精蛋白 G類葡聚糖凝膠（ SephadexG）的最基本骨架是葡聚糖，它是一種以右旋葡萄糖為殘基的多糖，分子間主要是 α1,6糖苷鍵（約占 95%），分枝為 l,3糖苷鍵（約占 5%），以 1氯 2,3環(huán)氧丙烷為交聯(lián)劑將鏈狀結(jié)構(gòu)連接為三維空間的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物。 ? 葡聚糖凝膠網(wǎng)孔大小可通過調(diào)節(jié)交聯(lián)劑和葡聚糖的配比及反應(yīng)條件來控制。交聯(lián)度越大，網(wǎng)孔越小，吸水膨脹就越小。交聯(lián)度越小，網(wǎng)孔越大，吸水膨脹就越大。 ? G類葡聚糖凝膠常用 GX代表， X數(shù)字既代表交聯(lián)度，也代表特水量。 X數(shù)字越小，交聯(lián)度越大，網(wǎng)孔越小，適用于分離低分子質(zhì)量生化產(chǎn)品。 X數(shù)字越大，交聯(lián)度越小，網(wǎng)孔越大，適用于分離高分子生化產(chǎn)品。 X數(shù)字也代表凝膠的持水量，如 G25表示 1g干膠持水 ， G100表示 1g干膠持水 10ml，依次類推。 1. 裝柱前準(zhǔn)備 : 先用自來水洗凈 ,再用蒸餾水洗凈 ,之后往層析柱加入 23ml蒸餾水 ,以確保凝膠底部沒有氣泡； 2. 裝柱：垂直裝柱，待凝膠裝至柱高的 1015cm即可（裝柱的時(shí)候注意要不斷混勻凝膠）。注意防止氣泡與分層 , 否則重新裝柱?？捎貌０魯嚢枋贡砻嫫秸?； 3. 平衡：反復(fù)加蒸餾水 ,平衡 10分鐘 .使蒸餾水維持在 34cm高度； 4. 加樣：待蒸餾水流至柱平面時(shí)（不可使柱平面干掉），馬上靠近柱平面小心滴加4滴樣品（注意盡量不要使床面攪動(dòng)），待樣品浸入到凝膠中后馬上加入 3－ 4滴蒸餾水 (動(dòng)作輕柔 )，反復(fù)兩次，然后加大量蒸餾水洗脫； 5. 收集樣品：樣品一旦加入后馬上用量筒收集流出液，注意向柱床上不斷加水，記錄紅色流出一半時(shí)的毫升數(shù)（血紅蛋白的 Ve，也即 Vo），繼續(xù)收集，記錄黃色流出一半時(shí)體積（魚精蛋白 Ve）； 實(shí)驗(yàn)操作
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