血紅蛋白的提取和分離-wenkub.com
2024-11-04 07:01 本頁面
【正文】 ch233。于它所帶凈電荷的多少以及分子的大小等因素。ir243。)透明的甲苯層 B脂溶性物質(zhì)的沉淀層 C血紅蛋白的水溶液 D其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物,C,D,C,第三十七頁，共三十九頁。,5．血液由血漿和各種血細(xì)胞組成，其中〔 〕的含量最多。nj237。,教學(xué)(jiāo xu233。y232。y232。,你能觀察到蛋白質(zhì)的別離(fēnl237。如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。)判斷的？,由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。,三、結(jié)果分析(fēnxī)與評價,你是否(sh236。nzhěng)過程嗎？,第三十頁，共三十九頁。,1.樣品的處理——通過洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液(r243。i)純度。,〔三〕SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳〔選做〕,鑒定血紅蛋白(xu232。ng)的pH范圍內(nèi)，維持結(jié)構(gòu)和功能正常。n)進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口 ④洗脫：小心參加pH=7.0 的20mmol/l的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度，連接緩沖液洗脫瓶，翻開下端出口進(jìn)行洗脫。使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動。,第二十五頁，共三十九頁。ngpǐn)參加與洗脫,①調(diào)節(jié)(ti225。不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象。 pǔ)柱的裝填,第二十三頁，共三十九頁。 注意： 凝膠裝填時盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。 ②凝膠的前處理(chǔlǐ)：配置凝膠懸浮液：計算并稱取一定量的凝膠浸泡于蒸餾水或洗脫液中充分溶脹后，配成凝膠懸浮液。,〔2〕凝膠色譜(s232。③頂塞的制作：打孔→安裝玻璃管。 pǔ)操作:,〔1〕凝膠色譜(s232。ng)：取1ml的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300ml的物質(zhì)的量濃度為20mmol/l的磷酸緩沖液中〔pH為7.0〕，透析12小時。 ③別離：用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。i)溶液：,①過程：將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以2000r/min的速度離心10 min。,(3)別離血紅蛋白(xu232。 鹽水洗滌：用五倍體積的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9％的氯化鈉溶液洗滌。)目的:,去除雜蛋白，以利于后續(xù)血紅蛋白的 別離(fēnl237。i)的原因是什么？,雞的紅細(xì)胞具有細(xì)胞核，含有DNA，便于進(jìn)行DNA的提??；人的紅細(xì)胞無細(xì)胞核，結(jié)構(gòu)簡單(jiǎndān)，血紅蛋白含量豐富，便于提取血紅蛋白。,用雞的紅細(xì)胞提取DNA，用豬、牛、羊的紅細(xì)胞提取血紅蛋白(xu232。h243。)鑒定,蛋白質(zhì)提取和別離(fēnl237。,二、實(shí)驗(yàn)(sh237。n yǒnɡ)，根據(jù)分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳區(qū)帶位置，可以測定未知蛋白質(zhì)的分子量。,2. SDS作用機(jī)理:,第十二頁，共三十九頁。由幾條肽鏈組成的蛋白質(zhì)復(fù)合體在SDS的作用下會解聚成單條(dānti225。ng)交聯(lián)〕,丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N’亞甲基雙丙烯酰胺的交聯(lián)共聚反響,第十一頁，共三十九頁。n
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