血紅蛋白的提取和分離-文庫吧
2024-11-04 07:01 本頁面
【正文】 ,N’亞甲基雙丙烯酰胺在引發(fā)劑和催化劑的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。,N,N’亞甲基雙丙烯酰胺〔形成(x237。ngch233。ng)交聯(lián)〕,丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N’亞甲基雙丙烯酰胺的交聯(lián)共聚反響,第十一頁，共三十九頁。,蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決 于它所帶凈電荷的多少(duōshǎo)以及分子的大小等因素。,1.原理(yu225。nlǐ)：,SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。由幾條肽鏈組成的蛋白質(zhì)復(fù)合體在SDS的作用下會解聚成單條(dānti225。o)肽鏈，因此測定的結(jié)果只是單條肽鏈的分子量。SDS能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物，SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量。因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差異，使電泳遷移率完全取決于分子的大小。,2. SDS作用機理:,第十二頁，共三十九頁。,用SDS —聚丙烯酰胺凝膠電泳測定(c232。d236。ng)蛋白質(zhì)分子量的方法,使用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)的分子量時，可選用一組分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白同時進(jìn)行電泳(di224。n yǒnɡ)，根據(jù)分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳區(qū)帶位置，可以測定未知蛋白質(zhì)的分子量。市場上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售。,第十三頁，共三十九頁。,第十四頁，共三十九頁。,二、實驗(sh237。y224。n)操作,樣品處理→粗別離→純化→純度(chnd249。)鑒定,蛋白質(zhì)提取和別離(fēnl237。)步驟,血液有哪些成分？,〔一〕血紅蛋白,第十五頁，共三十九頁。,每個肽鏈環(huán)繞一個亞鐵血紅素基團，此基團可攜帶一分子(fēnzǐ)氧或一分子(fēnzǐ)二氧化碳，血紅蛋白因含有血紅素而呈紅色。,血紅蛋白(xu232。h243。ng d224。nb225。i)的特點：,第十六頁，共三十九頁。,用雞的紅細(xì)胞提取DNA，用豬、牛、羊的紅細(xì)胞提取血紅蛋白(xu232。h243。ng d224。nb225。i)的原因是什么？,雞的紅細(xì)胞具有細(xì)胞核，含有DNA，便于進(jìn)行DNA的提??；人的紅細(xì)胞無細(xì)胞核，結(jié)構(gòu)簡單(jiǎndān)，血紅蛋白含量豐富，便于提取血紅蛋白。,第十七頁，共三十九頁。,(1)紅細(xì)胞的洗滌(xǐd237。):,①洗滌(xǐd237。)目的:,去除雜蛋白，以利于后續(xù)血紅蛋白的 別離(fēnl237。)純化，洗滌次數(shù)不可過少。,②洗滌操作：,采集血樣。 低速短時間離心〔速度越高和時間越長，會使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等一同沉淀，達(dá)不到別離的效果〕 吸取血漿：上層透明的黃色血漿。 鹽水洗滌：用五倍體積的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9％的氯化鈉溶液洗滌。 低速離心〔低速短時間〕 重復(fù)5步驟三次，直至上清液中已沒有黃色，說明洗滌干凈。,1.樣品處理及粗別離,〔二〕操作過程,第十八頁，共三十九頁。,(2)血紅蛋白的釋放：加蒸餾水到原血液體積(tǐjī)，再加40％體積的甲苯 ，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢?0分鐘〔加速細(xì)胞破裂〕,細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。,(3)別離血紅蛋白(xu232。h243。ng d
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