血紅蛋白與核黃素的凝膠層析分離電液-資料下載頁
2025-01-06 09:07本頁面
【正文】 ，調節(jié)高位貯液瓶的高度，控制流速為 1ml/min。用 2倍于床體積的洗脫液進行平衡，使層析床穩(wěn)定 . ?操作過程中應特別注意 ：① 在平衡與洗脫時要將高位貯液瓶至層析柱的連接管內的氣泡全部排出，以免影響流速 ；② 恒壓高位貯液瓶內玻璃管底端出口高度之差不能大于 40cm，以免影響流速 ；③ 平衡過程中務必防止層析床液體流干 。 防止層析床液體流干最簡單的方法是使連接高位貯液瓶與層析柱之間的導管形成U形， U形管底部低于層析柱的出口 ；④ 如果需要溫度平衡，可同時在層析柱夾套內通入恒溫水 。 ? （ 5）加樣與洗脫。 打開平衡好的層析柱低端出口，使柱內溶液流向與床表面相切時關閉出口。將吸有 1mm處沿管內壁輕輕轉動加樣，加完后，打開底端出口使樣品流至床表面，關閉出口，用少量洗脫液同樣小心清洗管內壁 1~2次，使樣品流至床表面，然后加洗脫液加至距床表面 2~3cm高，接上高位貯液瓶并調好流速即開始洗脫。 注意在加樣和洗脫過程中應緩慢加入液體，防止沖壞床表面，影響分辨率 。 ? （ 6）收集與測定。 收集時可使用自動部分收集器或手工操作，每管接洗脫液 降至基線附近。收集后用 721E型分光光度計在451nm波長處以洗脫液為空白，對每管收集液進行光吸收測定。以收集管數(shù)（或洗脫體積）為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制洗脫曲線。 [注 ] 市售凝膠如需徹底處理，可在溶脹后再用中浸泡半小時，但注意必須避免在酸或堿中加熱。另外，用過的凝膠柱如需再生，可用堵住網(wǎng)孔的雜質，然后用蒸餾水洗至中性備有。一般使用幾次后就需要再生了。
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