暑假中學(xué)骨干生物教師培訓(xùn)基因工程和細(xì)胞工程-資料下載頁(yè)
2025-01-18 01:40本頁(yè)面
【正文】 抗原決定簇，動(dòng)物免疫后可刺激多種具有相應(yīng)抗原受體的 B細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答，因而可產(chǎn)生多種針對(duì)不同抗原決定簇的抗體。這些由不同 B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的抗體稱為多克隆抗體（ polycolonal antibody, PcAb）。 單克隆抗體技術(shù)的核心是用骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)特定抗原免疫刺激的 B淋巴細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞既能象骨髓瘤細(xì)胞那樣在體外無(wú)限增殖，又具有 B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力。因此，單克隆抗體技術(shù)又稱為雜交瘤技術(shù)。 骨髓瘤細(xì)胞選擇 ? 骨髓瘤細(xì)胞本身不能分泌抗體 ? 選擇次黃嘌呤 鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶缺陷型（ HGPRT）或胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（ TK）瘤細(xì)胞 ? 在旁路合成途徑中， HGPRT負(fù)責(zé)催化磷酸核糖焦磷酸和嘌呤基形成嘌呤單磷酸核苷酸，而 TK可催化胸苷轉(zhuǎn)化為 5’單磷酸胸苷，作為胸苷脫氧核苷酸合成的材料。 HAT選擇培養(yǎng)基 ? 含次黃嘌呤（ H）、氨基蝶呤（ A）和胸腺嘧啶核苷（ T）的培養(yǎng)基，是動(dòng)物雜交細(xì)胞篩選中最常用的方法。在這種培養(yǎng)基中細(xì)胞只能利用旁路途徑合成 DNA，因而只有具有HGPRT+或 /和 TK+的細(xì)胞才能生長(zhǎng) 。 細(xì)胞內(nèi) DNA的合成途徑 ? 從頭合成途徑： 以氨基酸和其他小分子起始合成核苷酸，進(jìn)而合成 DNA 的過(guò)程；可被葉酸類似物 氨基蝶呤（ A） 阻斷； ? 旁路合成途徑 ：胸腺嘧啶脫氧核苷激酶（ TK）利用胸腺嘧啶核苷（ T）合成 DNA；次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（ HGPRT）利用次黃嘌呤（ H）合成 DNA。 單克隆抗體的大量制備 ? 體內(nèi)法：?jiǎn)慰寺〖?xì)胞注入到小鼠腹腔培養(yǎng)； ? 細(xì)胞培養(yǎng)：體外克隆培養(yǎng) . 單克隆抗體的應(yīng)用 ? 1. 作為親合層析的配體 ? 單克隆抗體能與其相應(yīng)的抗原特異性結(jié)合，因而能夠從復(fù)雜系統(tǒng)中識(shí)別出單個(gè)成分。只要得到針對(duì)某一成分的單克隆抗體，利用它作為配體，固定在層析柱上，通過(guò)親合層析，即可從復(fù)雜的混和物中分離、純化這一特定成分。如用抗人絨毛膜促性腺激素 (hCG)親合層析柱，就可從孕婦尿中提取到純的hCG。與其它提取方法 (沉淀法、高效疏水色譜法等 )相比，具有簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、產(chǎn)品活性高等優(yōu)點(diǎn)。 2. 作為生物治療的導(dǎo)向武器 ? 將針對(duì)某一腫瘤抗原的單克隆抗體與化療藥物或放療物質(zhì)連接，利用單克隆抗體的導(dǎo)向作用，將化療藥物或放療物質(zhì)攜帶至靶器官，可直接殺傷靶細(xì)胞。 ? 另外，將放射性標(biāo)記物與單克隆抗體連接，注入患者體內(nèi)可進(jìn)行放射免疫顯像，協(xié)助腫瘤的診斷。 治療用脂質(zhì)體 ? 單克隆抗體以其特異性強(qiáng)、純度高、均一性好等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、放射免疫分析、免疫組化和流式細(xì)胞儀等技術(shù)，目前，應(yīng)用單克隆抗體制作的商品化試劑盒廣泛應(yīng)用于：①病原微生物抗原、抗體的檢測(cè)；②腫瘤抗原的檢測(cè)；③免疫細(xì)胞及其亞群的檢測(cè)；④激素測(cè)定；⑤細(xì)胞因子的測(cè)定。 4. 作為研究抗原的探針 ? 例如前面講的 Western blotting。 5. 作為免疫抑制劑 ? 抗人 T淋巴細(xì)胞單抗 (McAb)作為一種新型免疫抑制劑，已廣泛應(yīng)用于臨床治療自身免疫疾病和抗器官移植的排斥反應(yīng)。注射抗小鼠Thy1抗原的單抗，可以抑制小鼠同種皮膚移植的排斥反應(yīng)。此外，對(duì)用于同種骨髓移植的供體骨髓，在體外經(jīng)抗 T細(xì)胞單抗加補(bǔ)體處理，能減輕移植物抗宿主病的發(fā)生。
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