暑假中學(xué)骨干生物教師培訓(xùn)基因工程和細(xì)胞工程(已修改)
2025-01-30 01:40 本頁面
【正文】 2022年暑假中學(xué)骨干教師培訓(xùn) 基因工程 和 細(xì)胞工程 生物材料 DNA mRNA 一定大小范圍 DNA PCR cDNA（互補(bǔ) DNA） 反轉(zhuǎn)錄 基因組文庫 cDNA文庫 基因文庫 包括 人工合成 限制酶切割 獲取目的基因 構(gòu)建表達(dá)載體 導(dǎo)入受體細(xì)胞 得到轉(zhuǎn)基因生物 目的基因檢測(cè)與鑒定 第一步 第二步 第三步 第四步 基因工程的基本操作程序 獲取目的基因 生物材料 PCR cDNA mRNA DNA 基因組文庫 cDNA文庫 一定大小范圍 DNA 人工合成 逆轉(zhuǎn)錄 限制酶切割 獲取目的基因 構(gòu)建表達(dá)載體 導(dǎo)入受體細(xì)胞 得到轉(zhuǎn)基因生物 目的基因檢測(cè)與鑒定 第一步 第二步 第三步 第四步 基因文庫 (gene library)概念 ?又稱 DNA文庫，是指某個(gè)生物的 基因組 DNA或 cDNA片段 與 適當(dāng)?shù)妮d體 在體外重組后，轉(zhuǎn)化 宿主細(xì)胞 ，通過篩選后得到大量的陽性菌落 (或噬菌體 )，所有菌落或噬菌體的集合即為該生物的基因文庫。 ?基因文庫由外源 DNA片段 、 載體 和 宿主細(xì)胞組成。 mRNA 結(jié)構(gòu)圖 DNA 結(jié)構(gòu)圖 基因組文庫 (Genomic library) ? 將某種生物體的全部基因組 DNA用限制性內(nèi)切酶或機(jī)械力量切割成一定長度范圍的 DNA片段，再與合適的 載體 在體外重組并轉(zhuǎn)化相應(yīng)的 宿主細(xì)胞 獲得的所有陽性菌落。 該文庫以 DNA片段的形式貯存著該生物全部基因組的信息，可用于 分離目的基因和保存某種生物的全部基因。 基因組文庫 cDNA文庫 (cDNA library) ? 提取某生物組織或發(fā)育時(shí)期的總 mRNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的 cDNA片段分別與克隆 載體 重組，儲(chǔ)存于 受體菌 中，該群體就稱該生物基因組的 cDNA文庫。 ? cDNA(plementary DNA，互補(bǔ) DNA)：是由生物的某一特定器官或特定發(fā)育時(shí)期細(xì)胞內(nèi)的mRNA經(jīng)體外反轉(zhuǎn)錄后形成的互補(bǔ) DNA。 結(jié)構(gòu)基因 外顯子 內(nèi)含子 轉(zhuǎn)錄、加工修飾 mRNA cDNA文庫 反轉(zhuǎn)錄酶 cDNA 克隆、轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、鑒定 構(gòu)建基因文庫的基本程序 1)提取研究對(duì)象基因組 DNA，制備合適大小的 DNA片段，或提取組織或器官的 mRNA并反轉(zhuǎn)錄成 cDNA； 2) DNA片段或 cDNA片段與經(jīng)特殊處理的 載體 連接形成重組 DNA； 3)重組 DNA轉(zhuǎn)化 宿主細(xì)胞 或體外包裝后侵染受體菌； 4)陽性重組菌落或噬菌斑的篩選。 基因組 DNA文庫 cDNA文庫 基因組文庫的類型 根據(jù)所選用的 載體 可以分為： 質(zhì)粒文庫、噬菌體文庫、人工染色體文庫（細(xì)菌人工染色體文庫、酵母人工染色體文庫）。 基因組文庫的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 一個(gè)理想的基因組文庫應(yīng)具備下列條件： ? 重組克隆的總數(shù)不宜過大 ，以減輕篩選工作的壓力； ? 載體的裝載量最好大于基因的長度，避免基因被分隔克隆； ? 克隆與克隆之間必須存在足夠長度的重疊區(qū)域，以利于克隆排序； ? 克隆片段易于從載體分子上完整卸下； ? 重組克隆能穩(wěn)
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