暑假中學(xué)骨干生物教師培訓(xùn)基因工程和細(xì)胞工程-wenkub.com
2025-01-15 01:40 本頁面
【正文】 此外，對用于同種骨髓移植的供體骨髓，在體外經(jīng)抗 T細(xì)胞單抗加補(bǔ)體處理，能減輕移植物抗宿主病的發(fā)生。 治療用脂質(zhì)體 ? 單克隆抗體以其特異性強(qiáng)、純度高、均一性好等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附試驗、放射免疫分析、免疫組化和流式細(xì)胞儀等技術(shù)，目前，應(yīng)用單克隆抗體制作的商品化試劑盒廣泛應(yīng)用于：①病原微生物抗原、抗體的檢測；②腫瘤抗原的檢測；③免疫細(xì)胞及其亞群的檢測；④激素測定；⑤細(xì)胞因子的測定。如用抗人絨毛膜促性腺激素 (hCG)親合層析柱，就可從孕婦尿中提取到純的hCG。在這種培養(yǎng)基中細(xì)胞只能利用旁路途徑合成 DNA，因而只有具有HGPRT+或 /和 TK+的細(xì)胞才能生長 。 單克隆抗體技術(shù)的核心是用骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)特定抗原免疫刺激的 B淋巴細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞既能象骨髓瘤細(xì)胞那樣在體外無限增殖，又具有 B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力。 構(gòu)象決定簇與線性決定簇 單克隆抗體 定義： 由單一克隆 B細(xì)胞雜交瘤產(chǎn)生的、只識別抗原分子某一特定抗原決定簇的高度特異性的抗體。 三、電融合法 電融合法是在直流電脈沖的誘導(dǎo)下，細(xì)胞膜表面的氧化還原電位發(fā)生改變，使異種細(xì)胞粘合并發(fā)生質(zhì)膜瞬間破裂，進(jìn)而質(zhì)膜開始連接，直到閉和成完整的膜，形成融合體。 ?顯微鏡下細(xì)胞融合過程 細(xì)胞融合的常用方法 一、滅活病毒法 ①兩種細(xì)胞在一起培養(yǎng)，加入滅活病毒，在 4℃ 條件下病毒附著在細(xì)胞膜上。這對于種質(zhì)資源的開發(fā)和利用具有深遠(yuǎn)的意義。根據(jù)檢測結(jié)果，從而可得知被檢細(xì)胞內(nèi)目的蛋白表達(dá)與否、表達(dá)量及分子量等情況。 Southern雜交和 Northern雜交過程示意圖 Western雜交 ? 中文一般稱為蛋白質(zhì)印跡技術(shù)。 放射自顯影 DNA印跡轉(zhuǎn)移 探針雜交 － ＋ 將 RNA分子從電泳凝膠轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜或其他化學(xué)修飾的活性濾紙上，進(jìn)行核酸雜交的一種實驗方法。 ? (2) 將 DNA片段轉(zhuǎn)移到固體支持物 (硝酸纖維素濾膜或尼龍膜 )上。 ? 核酸分子雜交是指核酸分子 (DNA或 RNA)在變性以后，在復(fù)性的過程中兩個不同來源的且同源的核酸分子形成雜合雙鏈的過程。 目的基因檢測與鑒定 ? 通常采用 分子雜交 的方法。 為什么要建基因文庫？ PCR法獲取目的基因 已知基因： ? 設(shè)計合成一對引物，直接從基因組 DNA（或文庫）中擴(kuò)增該目的基因。 對應(yīng)的菌斑或噬菌斑位置不變，可以直接找出陽性菌落。 從基因文庫中篩選目的基因 ： 核酸雜交 (探針 ）和 PCR（引物） ： 免疫學(xué)檢測 （抗原抗體反應(yīng)） 探針 ? 探針 是一小段帶標(biāo)記的單鏈 DNA或者 RNA片段（大約是 20到 500bp）， 用于檢測與其互補(bǔ)的核酸序列。 基因組 DNA文庫 cDNA文庫 基因組文庫的類型 根據(jù)所選用的 載體 可以分為： 質(zhì)粒文庫、噬菌體文庫、人工染色體文庫（細(xì)菌人工染色體文庫、酵母人工染色體文庫）。 該文庫以 DNA片段的形式貯存著該生物全部基因組的信息，可用于 分離目的基因和保存某種生物的全部基因。2022年暑假中學(xué)骨干教師培訓(xùn) 基因工程 和 細(xì)胞工程 生物材料
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