暑假中學(xué)骨干生物教師培訓(xùn)基因工程和細(xì)胞工程(參考版)
2025-01-21 01:40本頁(yè)面
【正文】 。注射抗小鼠Thy1抗原的單抗，可以抑制小鼠同種皮膚移植的排斥反應(yīng)。 4. 作為研究抗原的探針 ? 例如前面講的 Western blotting。 ? 另外，將放射性標(biāo)記物與單克隆抗體連接，注入患者體內(nèi)可進(jìn)行放射免疫顯像，協(xié)助腫瘤的診斷。與其它提取方法 (沉淀法、高效疏水色譜法等 )相比，具有簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、產(chǎn)品活性高等優(yōu)點(diǎn)。只要得到針對(duì)某一成分的單克隆抗體，利用它作為配體，固定在層析柱上，通過親合層析，即可從復(fù)雜的混和物中分離、純化這一特定成分。 細(xì)胞內(nèi) DNA的合成途徑 ? 從頭合成途徑： 以氨基酸和其他小分子起始合成核苷酸，進(jìn)而合成 DNA 的過程；可被葉酸類似物 氨基蝶呤（ A） 阻斷； ? 旁路合成途徑 ：胸腺嘧啶脫氧核苷激酶（ TK）利用胸腺嘧啶核苷（ T）合成 DNA；次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（ HGPRT）利用次黃嘌呤（ H）合成 DNA。 HAT選擇培養(yǎng)基 ? 含次黃嘌呤（ H）、氨基蝶呤（ A）和胸腺嘧啶核苷（ T）的培養(yǎng)基，是動(dòng)物雜交細(xì)胞篩選中最常用的方法。因此，單克隆抗體技術(shù)又稱為雜交瘤技術(shù)。這些由不同 B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的抗體稱為多克隆抗體（ polycolonal antibody, PcAb）。每種單克隆抗體其分子結(jié)構(gòu)完全相同。 抗原決定簇 ? 抗原分子中存在的能與抗體 Fab片段特異性結(jié)合的特殊化學(xué)基團(tuán)，是免疫應(yīng)答特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)。 電融合法的優(yōu)點(diǎn)： ?融合率高，重復(fù)性強(qiáng)，對(duì)細(xì)胞傷害??； ?裝置精巧，方法簡(jiǎn)單，可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程； ?免去 PEG誘導(dǎo)后的洗滌過程，誘導(dǎo)過程可控性強(qiáng)。其缺點(diǎn)是融合過程繁瑣， PEG可能對(duì)細(xì)胞有毒害。并使兩細(xì)胞相互凝聚； ②在 37℃ 中，病毒與細(xì)胞膜發(fā)生反應(yīng)，細(xì)胞膜受到破環(huán)，此時(shí)需要 Ca2+和 Mg2+，最適 PH為 ； ②細(xì)胞膜連接部穿通，周邊連接部修復(fù)，此時(shí)需 Ca2+和 ATP； ④融合成大細(xì)胞，需 ATP 。 ?淋巴細(xì)胞雜交瘤和單克隆抗體的制備。 ?繞開了種間生殖隔離的限制，為遠(yuǎn)緣物種間的遺傳物質(zhì)交換提供了有效途徑。 細(xì)胞融合的意義 ?理論上說任何細(xì)胞，都有可能通過體細(xì)胞雜交而成為新的生物資源。 第一步 抗體識(shí)別抗原 第二步 第二抗體識(shí)別第一抗體 第三步 顏色反應(yīng) Western雜交結(jié)果圖 建立文庫(kù)需要重組子的數(shù)目 ? N=ln(1P)/ln(11/n) ? N：重組子數(shù)目； ? P：文庫(kù)中包括任意 DNA片段的概率； ? n：總基因組堿基數(shù) /克隆片段堿基數(shù)。 Western雜交過程 ? 經(jīng)過 SDSPAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素膜）上，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的目的蛋白。其基本原理是通過 特異性抗體 對(duì)凝膠電泳分離的細(xì)胞或生物組織 蛋白樣品 進(jìn)行檢測(cè)。 ④ Northern雜交 ， 通過顯影檢查目的 DNA所在的位置 。 Northern雜交 Northern雜交的過程 ① 提取總 RNA ② 分離 mRNA， 利用親和層析的原理純化 mRNA。 ? (5) 通過顯影檢查目的 DNA所在的位置。
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