【年會(huì)報(bào)告】-xxxx生物教育年會(huì)報(bào)告基因工程與細(xì)胞工程(參考版)
2025-02-07 17:04本頁(yè)面
【正文】 謝謝觀(guān)看 /歡迎下載BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH。注射抗小鼠 Thy1抗原的單抗，可以抑制小鼠同種皮膚移植的排斥反應(yīng)。 4. 作為研究抗原的探針n 例如前面講的 Western blotting。 n 另外，將放射性標(biāo)記物與單克隆抗體連接，注入患者體內(nèi)可進(jìn)行放射免疫顯像，協(xié)助腫瘤的診斷。與其它提取方法 (沉淀法、高效疏水色譜法等 )相比，具有簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、產(chǎn)品活性高等優(yōu)點(diǎn)。只要得到針對(duì)某一成分的單克隆抗體，利用它作為配體，固定在層析柱上，通過(guò)親合層析，即可從復(fù)雜的混和物中分離、純化這一特定成分。一般是綜合采用幾種方法分步進(jìn)行純化。 單克隆抗體的純化n 通過(guò)上述培養(yǎng)之后獲得的培養(yǎng)液或腹水，其中除了單克隆抗體之外，還有無(wú)關(guān)的蛋白質(zhì)等其他物質(zhì)，因此必須對(duì)產(chǎn)品做分離純化。單克隆抗體的大量制備n 體內(nèi)法：將穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞注入到小鼠腹腔培養(yǎng)，然后從腹水中分離、提取單克隆抗體。 雜交瘤細(xì)胞的克隆培養(yǎng) n 有限稀釋法 ：將稀釋到一定密度的雜交瘤細(xì)胞接種到 96孔培養(yǎng)板中，盡可能使每個(gè)孔中只有一個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)； n 軟瓊脂培養(yǎng)法 ：軟瓊脂的半固態(tài)性質(zhì)，使單個(gè)的雜交瘤細(xì)胞在相對(duì)固定的位置上增殖形成細(xì)胞克隆。在這種培養(yǎng)基中細(xì)胞只能利用旁路途徑合成 DNA，因而只有具有 HGPRT+或 /和 TK+的細(xì)胞才能生長(zhǎng) 。n 在旁路合成途徑中， HGPRT負(fù)責(zé)催化磷酸核糖焦磷酸和嘌呤基形成嘌呤單磷酸核苷酸，而 TK可催化胸苷轉(zhuǎn)化為 5’單磷酸胸苷，作為胸苷脫氧核苷酸合成的材料。加強(qiáng)免疫后 4～ 5天，取脾臟分離 B淋巴細(xì)胞備用。致敏 B淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備 n 用目的抗原免疫小鼠時(shí)，應(yīng)選用純系、健康的 8周齡 BALB／ c小白鼠作為免疫動(dòng)物，這樣可以獲得大量激活的淋巴細(xì)胞。 單克隆抗體技術(shù)的核心是用骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)特定抗原免疫刺激的 B淋巴細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞既能象骨髓瘤細(xì)胞那樣在體外無(wú)限增殖，又具有 B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力。多克隆抗體 定義 ： 抗原分子通常具有多個(gè)抗原決定簇，動(dòng)物免疫后可刺激多種具有相應(yīng)抗原受體的 B細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答，因而可產(chǎn)生多種針對(duì)不同抗原決定簇的抗體。單克隆抗體 定義： 由單一克隆 B細(xì)胞雜交瘤產(chǎn)生的、只識(shí)別抗原分子某一特定抗原決定簇的高度特異性的抗體。這些外顯子通過(guò)多種多樣的隨機(jī)組合重排所合成出的肽鏈，還要再進(jìn)一步進(jìn)行 L和 H鏈的隨機(jī)組合，這樣最后生成的抗體種類(lèi)就非常多了?？贵w多樣性的遺傳學(xué)基礎(chǔ) n 抗體的 L鏈?zhǔn)怯?C、 V、 J三個(gè)基因簇編碼的， H鏈由 C、 V、 D、 J四個(gè)基因簇編碼的。高變區(qū)的氨基酸序列決定了該抗體結(jié)合抗原的特異性?？勺儏^(qū)位于 “Y”的兩臂末端。整個(gè)抗體分子可分為恒定區(qū)和可變區(qū)兩部分。抗體結(jié)構(gòu) n 抗體是具有 4條多肽鏈的對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu)，其中 2條較長(zhǎng)、相對(duì)分子量較大的相同的重鏈 (H鏈 )；2條較短、相對(duì)分子量較小的相同的輕鏈 (L鏈 )。最常用方法是應(yīng)用合適的選擇培養(yǎng)基，使親本細(xì)胞死亡，而僅讓雜交細(xì)胞存活下來(lái)。融合細(xì)胞的篩選 n 細(xì)胞融合后，會(huì)形成由未融合的親本細(xì)胞、同核體以及異核體組成的細(xì)胞混合群體。三、電融合法 細(xì)胞首先在交流電場(chǎng)中極化并沿電力線(xiàn)排列
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