【年會(huì)報(bào)告】-xxxx生物教育年會(huì)報(bào)告基因工程與細(xì)胞工程(已改無(wú)錯(cuò)字)
2023-02-24 17:04:00 本頁(yè)面
【正文】 聯(lián)結(jié)形成一個(gè)由 4條多肽鏈構(gòu)成的單體分子。整個(gè)抗體分子可分為恒定區(qū)和可變區(qū)兩部分。抗體的結(jié)構(gòu)圖“Y”型，四肽鏈重鏈 （ 5種 : ?、 ?、 ?、 ?、 ?） 輕鏈 （ 2種 : ?? 、 ?? ）可變區(qū) （ V區(qū)） 超變區(qū) 骨架區(qū)恒定區(qū) （ C區(qū)）鉸鏈區(qū)抗體結(jié)構(gòu)n 在給定的物種中，不同抗體分子的恒定區(qū)都具有相同的或幾乎相同的氨基酸序列?？勺儏^(qū)位于 “Y”的兩臂末端。在可變區(qū)內(nèi)有一小部分氨基酸殘基變化特別強(qiáng)烈，這些區(qū)域稱(chēng)高變區(qū)。高變區(qū)的氨基酸序列決定了該抗體結(jié)合抗原的特異性。一個(gè)抗體分子上的兩個(gè)抗原結(jié)合部位是相同的，位于兩臂末端，稱(chēng)抗原結(jié)合片段 (antigenbinding fragment, Fab)?？贵w多樣性的遺傳學(xué)基礎(chǔ) n 抗體的 L鏈?zhǔn)怯?C、 V、 J三個(gè)基因簇編碼的， H鏈由 C、 V、 D、 J四個(gè)基因簇編碼的。 V編碼可變區(qū)，有 300個(gè)種類(lèi)； D編碼高變區(qū) ,有 15 ～ 20個(gè)種類(lèi)； J編碼連接 V、 C的結(jié)合區(qū)，有 4～ 5個(gè)種類(lèi)； C編碼恒定區(qū)，僅有一種。這些外顯子通過(guò)多種多樣的隨機(jī)組合重排所合成出的肽鏈，還要再進(jìn)一步進(jìn)行 L和 H鏈的隨機(jī)組合，這樣最后生成的抗體種類(lèi)就非常多了。抗原決定簇n 抗原分子中存在的能與抗體 Fab片段特異性結(jié)合的特殊化學(xué)基團(tuán)，是免疫應(yīng)答特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)。單克隆抗體 定義： 由單一克隆 B細(xì)胞雜交瘤產(chǎn)生的、只識(shí)別抗原分子某一特定抗原決定簇的高度特異性的抗體。每種單克隆抗體其分子結(jié)構(gòu)完全相同。多克隆抗體 定義 ： 抗原分子通常具有多個(gè)抗原決定簇，動(dòng)物免疫后可刺激多種具有相應(yīng)抗原受體的 B細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答，因而可產(chǎn)生多種針對(duì)不同抗原決定簇的抗體。這些由不同 B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的抗體稱(chēng)為多克隆抗體（ polycolonal antibody, PcAb）。 單克隆抗體技術(shù)的核心是用骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)特定抗原免疫刺激的 B淋巴細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞既能象骨髓瘤細(xì)胞那樣在體外無(wú)限增殖，又具有 B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力。因此，單克隆抗體技術(shù)又稱(chēng)為雜交瘤技術(shù)。致敏 B淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備 n 用目的抗原免疫小鼠時(shí)，應(yīng)選用純系、健康的 8周齡 BALB／ c小白鼠作為免疫動(dòng)物，這樣可以獲得大量激活的淋巴細(xì)胞。n 一般將各種病毒、細(xì)菌和癌細(xì)胞作為目的抗原接種動(dòng)物制作抗原，其方法是將目的抗原進(jìn)行腹腔或皮下注射，一般要進(jìn)行初次免疫、二次免疫和加強(qiáng)免疫。加強(qiáng)免疫后 4～ 5天，取脾臟分離 B淋巴細(xì)胞備用。骨髓瘤細(xì)胞選擇n 骨髓瘤細(xì)胞本身不能分泌抗體n 選擇次黃嘌呤 鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶缺陷型（ HGPRT）或胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（ TK）瘤細(xì)胞細(xì)胞內(nèi) DNA的合成途徑n 從頭合成途徑： 以氨基酸和其他小分子起始合成核苷酸，進(jìn)而合成 DNA 的過(guò)程；可被葉酸類(lèi)似物 氨基蝶呤（ A） 阻斷；n 旁路合成途徑 ：胸腺嘧啶脫氧核苷激酶（TK）利用胸腺嘧啶核苷（ T）合成 DNA；次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（ HGPRT）利用次黃嘌呤（ H）合成 DNA。n 在旁路合成途徑中， HGPRT負(fù)責(zé)催化磷酸核糖焦磷酸和嘌呤基形成嘌呤單磷酸核苷酸，而 TK可催化胸苷轉(zhuǎn)化為 5’單磷酸胸苷，作為胸苷脫氧核苷酸合成的材料。HAT選擇培養(yǎng)基n 含次黃嘌呤（ H）、氨基蝶呤（ A）和胸腺嘧啶核苷（ T）的培養(yǎng)基，是動(dòng)物雜交細(xì)胞篩選中最常用的方法。在這種培養(yǎng)基中細(xì)胞只能利用旁路途徑合成 DNA，因而只有具有 HGPRT+或 /和 T
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