【年會報告】-xxxx生物教育年會報告基因工程與細胞工程-在線瀏覽
2025-03-09 17:04本頁面
【正文】 光標記的抗體所識別，從而顯示出位置。對應的菌斑或噬菌斑位置不變，可以直接找出陽性菌落。未知基因：n 參照其他物種中該基因的兩末端設計引物，從基因組 DNA（或文庫）中擴增該目的基因；n 依照其他物種中該基因的保守區(qū)段序列設計引物，擴增出一段 DNA，標記為探針，從基因組文庫、 cDNA文庫中釣出該基因?；瘜W合成法通常主要用于制備探針和引物。目的基因檢測與鑒定n 通常采用 分子雜交 的方法。n 根據(jù)其檢測對象的不同可分為 Southern 雜交 （DNA）、 Northern 雜交 （ RNA）和 Western 雜交 （蛋白質） 。 Southern雜交 (檢測目的基因是否插入到受體細胞基因組中）n (1)提取 DNA，酶切，凝膠電泳分離各酶切片段，然后使 DNA原位變性。 n (3) 預雜交濾膜，掩蓋濾膜上非特異性位點。 n (5) 通過顯影檢查目的 DNA所在的位置。一種實驗方法。 ③ 制備目標 RNA的探針： 根據(jù) mRNA序列合成同源 DNA探針，或以 cDNA為探針。 Southern雜交和 Northern雜交過程示意圖 Western雜交（檢測目的基因是否翻譯成蛋白質）n 中文一般稱為蛋白質印跡技術。n Western Blot與 Southern雜交或 Northern雜交方法類似，但 Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質， “探針 ”是抗體， “顯色 ”用標記的二抗。n 根據(jù)檢測結果，從而可得知被檢細胞內(nèi)目的蛋白表達與否、表達量及分子量等情況。細胞融合的常用方法一、滅活病毒法：二、聚乙二醇（ PEG）法：三、電融合法：一、滅活病毒法1. 兩個原生質體或細胞在病毒黏結作用下彼此靠近；2. 通過病毒與細胞膜的作用使兩個細胞膜互相滲透，胞質互相滲透；3. 兩個細胞的細胞核互相融合，兩個細胞融為一體；4. 進入正常的細胞分裂途徑，分裂成含有兩種染色體的雜種細胞。n PEG分子具有輕微的負極性，故可以與具有正極性基團的水、蛋白質和碳水化合物等形成 H鍵，從而在在質膜之間形成分子橋，其結果是使細胞質膜發(fā)生粘連進而促使質膜的融合 .PEG誘導融合的特點 ： 其優(yōu)點是融合成本低，不需特殊設備；融合子異核率較高；融合過程不受物種限制。 電融合法的優(yōu)點：u融合率高，重復性強，對細胞傷害??；u裝置精巧，方法簡單，可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程；u免去 PEG誘導后的洗滌過程，誘導過程可控性強。可根據(jù)不同細胞生理生化特性的差異，設計具體的篩選方案和選擇體系，優(yōu)先選擇雜交細胞或只允許雜交細胞生長，以淘汰親本細胞。u基于酶缺陷型細胞和藥物抗性所建立的雜種篩選u基于營養(yǎng)缺陷型細胞所建立的雜種篩選u由溫度敏感型細胞組成的雜種細胞的篩選u具有所需性狀雜種細胞的篩選常用的雜種細胞篩選方法 雜交瘤技術與單克隆抗體抗體 由抗原刺激 B淋巴細胞產(chǎn)生的，并能與刺激其產(chǎn)生的抗原發(fā)生特異性結合的、具有免疫功能的糖蛋白。鏈間由二硫鍵和非共價鍵聯(lián)結形成一個由 4條多肽鏈構成的單體分子?？贵w的結構圖“Y”型，四肽鏈重鏈 （ 5種 : ?、 ?、 ?、 ?、 ?） 輕鏈 （ 2種 : ?? 、 ?? ）可變區(qū) （ V區(qū)） 超變區(qū) 骨架區(qū)恒定區(qū) （ C區(qū)）鉸鏈區(qū)抗體結構n 在給定的物種中，不同抗體分子的恒定區(qū)都具有相同的或幾乎相同的氨基酸序列。在可變區(qū)內(nèi)有一小部分氨基酸殘基變化特別強烈，這些區(qū)域稱
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