【年會(huì)報(bào)告】-xxxx生物教育年會(huì)報(bào)告基因工程與細(xì)胞工程-展示頁
2025-02-11 17:04本頁面
【正文】 出來并與濾膜原位結(jié)合 ,再與特異性 DNA探針 雜交 ,篩選出含有目的序列的菌落。 n 最初是使用帶放射性的 DNA探針，通過放射自顯影來顯示位置。因此，要想從龐大的基因組中分離某個(gè)特定的 未知基因 非常困難，因此 先把材料 DNA分成若干易于處理的片段，然后確定目標(biāo)序列在哪一片段，再進(jìn)一步從該片段尋找目標(biāo)序列，事情就變得容易了。基因組 DNA文庫 cDNA文庫基因組文庫的類型 根據(jù)所選用的 載體 可以分為： 質(zhì)粒文庫、噬菌體文庫、人工染色體文庫（細(xì)菌人工染色體文庫、酵母人工染色體文庫）?；蚪M文庫cDNA文庫 (cDNA library) n 提取某生物組織或發(fā)育時(shí)期的總 mRNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的 cDNA (plementary DNA，互補(bǔ)DNA)片段分別與克隆 載體 重組，儲(chǔ)存于 受體菌中，該群體就稱該生物基因組的 cDNA文庫。 基因組文庫 (Genomic library)n 將某種生物體的 全部基因組 DNA用限制性內(nèi)切酶或機(jī)械力量切割成一定長度范圍的 DNA片段，再與合適的 載體 在體外重組并轉(zhuǎn)化相應(yīng)的 宿主細(xì)胞 獲得的所有陽性菌落。2023年省生物教學(xué)學(xué)會(huì)年會(huì)報(bào)告 基因工程 和 細(xì)胞工程 福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 肖義軍 生物材料DNA mRNA一定大小范圍 DNA PCRcDNA（互補(bǔ) DNA）反轉(zhuǎn)錄基因組文庫 cDNA文庫 基因文庫包括 人工合成限制酶切割獲取目的基因構(gòu)建表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞得到轉(zhuǎn)基因生物目的基因檢測與鑒定第一步第二步第三步第四步基因工程的基本操作程序獲取目的基因生物材料PCRcDNAmRNADNA基因組文庫 cDNA文庫一定大小范圍 DNA人工合成逆轉(zhuǎn)錄限制酶切割獲取目的基因構(gòu)建表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞得到轉(zhuǎn)基因生物目的基因檢測與鑒定第一步第一步第二步第二步第三步第三步第四步第四步基因文庫 (gene library)概念u又稱 DNA文庫，是指某個(gè)生物的 基因組 DNA或 cDNA片段 與 適當(dāng)?shù)妮d體 在體外重組后，轉(zhuǎn)化 宿主細(xì)胞 ，通過篩選后得到大量的陽性菌落 (或噬菌體 )，所有菌落或噬菌體的集合即為該生物的基因文庫。u基因文庫由外源 DNA片段 、 載體 和 宿主細(xì)胞組成。 該文庫以 DNA片段的形式貯存著該生物全部基因組的信息，可用于 分離目的基因和保存某種生物的全部基因。結(jié)構(gòu)基因外顯子內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄、加工修飾mRNAcDNA文庫文庫反轉(zhuǎn)錄酶 cDNA克隆、轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、鑒定克隆、轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、鑒定 構(gòu)建基因文庫的基本程序1)提取研究對象基因組 DNA，制備合適大小的 DNA片段，或提取組織或器官的 mRNA并反轉(zhuǎn)錄成 cDNA；2) DNA片段或 cDNA片段與經(jīng)特殊處理的 載體 連接形成重組 DNA；3)重組 DNA轉(zhuǎn)化 宿主細(xì)胞 或體外包裝后侵染受體菌；4)陽性重組菌落或噬菌斑的篩選。n 高等生物的基因組 DNA十分復(fù)雜 ,單個(gè)基因在基因組或某個(gè)特定發(fā)育階段或特定組織中所占比例很小。為什么要建基因文庫？ 從基因文庫中篩選目的基因： 核酸雜交 和 PCR： 免疫學(xué)檢測 （抗原抗體反應(yīng)）探針n 探針 是一小段帶標(biāo)記的單鏈 DNA或者 RNA片段（大約是 20到 500bp）， 用于檢測與其互補(bǔ)的核酸序列。后來又發(fā)明了免疫探針法，將探針核苷酸的側(cè)鏈加以改造，探針雜交后，其側(cè)鏈可被帶有熒
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