暑假中學(xué)骨干生物教師培訓(xùn)基因工程和細(xì)胞工程-展示頁(yè)
2025-01-27 01:40本頁(yè)面
【正文】 ，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的 cDNA片段分別與克隆 載體 重組，儲(chǔ)存于 受體菌 中，該群體就稱(chēng)該生物基因組的 cDNA文庫(kù)。 mRNA 結(jié)構(gòu)圖 DNA 結(jié)構(gòu)圖 基因組文庫(kù) (Genomic library) ? 將某種生物體的全部基因組 DNA用限制性?xún)?nèi)切酶或機(jī)械力量切割成一定長(zhǎng)度范圍的 DNA片段，再與合適的 載體 在體外重組并轉(zhuǎn)化相應(yīng)的 宿主細(xì)胞 獲得的所有陽(yáng)性菌落。2022年暑假中學(xué)骨干教師培訓(xùn) 基因工程 和 細(xì)胞工程 生物材料 DNA mRNA 一定大小范圍 DNA PCR cDNA（互補(bǔ) DNA） 反轉(zhuǎn)錄 基因組文庫(kù) cDNA文庫(kù) 基因文庫(kù) 包括 人工合成 限制酶切割 獲取目的基因 構(gòu)建表達(dá)載體 導(dǎo)入受體細(xì)胞 得到轉(zhuǎn)基因生物 目的基因檢測(cè)與鑒定 第一步 第二步 第三步 第四步 基因工程的基本操作程序 獲取目的基因 生物材料 PCR cDNA mRNA DNA 基因組文庫(kù) cDNA文庫(kù) 一定大小范圍 DNA 人工合成 逆轉(zhuǎn)錄 限制酶切割 獲取目的基因 構(gòu)建表達(dá)載體 導(dǎo)入受體細(xì)胞 得到轉(zhuǎn)基因生物 目的基因檢測(cè)與鑒定 第一步 第二步 第三步 第四步 基因文庫(kù) (gene library)概念 ?又稱(chēng) DNA文庫(kù)，是指某個(gè)生物的 基因組 DNA或 cDNA片段 與 適當(dāng)?shù)妮d體 在體外重組后，轉(zhuǎn)化 宿主細(xì)胞 ，通過(guò)篩選后得到大量的陽(yáng)性菌落 (或噬菌體 )，所有菌落或噬菌體的集合即為該生物的基因文庫(kù)。 ?基因文庫(kù)由外源 DNA片段 、 載體 和 宿主細(xì)胞組成。 該文庫(kù)以 DNA片段的形式貯存著該生物全部基因組的信息，可用于 分離目的基因和保存某種生物的全部基因。 ? cDNA(plementary DNA，互補(bǔ) DNA)：是由生物的某一特定器官或特定發(fā)育時(shí)期細(xì)胞內(nèi)的mRNA經(jīng)體外反轉(zhuǎn)錄后形成的互補(bǔ) DNA。 基因組 DNA文庫(kù) cDNA文庫(kù) 基因組文庫(kù)的類(lèi)型 根據(jù)所選用的 載體 可以分為： 質(zhì)粒文庫(kù)、噬菌體文庫(kù)、人工染色體文庫(kù)（細(xì)菌人工染色體文庫(kù)、酵母人工染色體文庫(kù)）。 cDNA文庫(kù)的主要優(yōu)點(diǎn) ① cDNA文庫(kù)特別適用于某些 RNA病毒的基因組結(jié)構(gòu)研究及有關(guān)基因的克隆分離； ② cDNA文庫(kù)較小，易于篩選； ③ cDNA文庫(kù)可用于在細(xì)菌中表達(dá)真核生物的基因； ④ cDNA文庫(kù)結(jié)合基因組文庫(kù)可用于真核細(xì)胞 mRNA的結(jié)構(gòu)和功能研究。 從基因文庫(kù)中篩選目的基因 ： 核酸雜交 (探針 ）和 PCR（引物） ： 免疫學(xué)檢測(cè) （抗原抗體反應(yīng)） 探針 ? 探針 是一小段帶標(biāo)記的單鏈 DNA或者 RNA片段（大約是 20到 500bp）， 用于檢測(cè)與其互補(bǔ)的核酸序列。后來(lái)又發(fā)明了免疫探針?lè)?，將探針核苷酸的?cè)鏈加以改造，探針雜交后，其側(cè)鏈可被帶有熒光標(biāo)記的抗體所識(shí)別，從而顯示出位置。 對(duì)應(yīng)的菌斑或噬菌斑位置不變，可以直接找出陽(yáng)性菌落。 免疫篩選法 放射性抗體檢測(cè)法 濾膜（固定抗體） + 免疫沉淀檢測(cè)法 菌落 沉淀素 ? 高等生物的基因組 DNA十分復(fù)雜 ,單個(gè)基因在基因
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