【年會(huì)報(bào)告】-xxxx生物教育年會(huì)報(bào)告基因工程與細(xì)胞工程-資料下載頁(yè)
2025-02-05 17:04本頁(yè)面
【正文】 K+的細(xì)胞才能生長(zhǎng) 。在 HAT選擇培養(yǎng)基中骨髓瘤瘤細(xì)胞（ HGPRT或 TK）及其同核體： 不能增殖， → 死亡；B淋巴細(xì)胞及其同核體： 體外培養(yǎng)條件下增殖次數(shù)有限， → 死亡；雜交瘤細(xì)胞： → 存活陽(yáng)性細(xì)胞的篩選n 將融合細(xì)胞充分稀釋，進(jìn)行克隆培養(yǎng)；然后再通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 ( ELISA) ，篩選出能夠分泌較高水平抗體的融合細(xì)胞，即陽(yáng)性細(xì)胞，再進(jìn)行克隆化培養(yǎng)。 雜交瘤細(xì)胞的克隆培養(yǎng) n 有限稀釋法 ：將稀釋到一定密度的雜交瘤細(xì)胞接種到 96孔培養(yǎng)板中，盡可能使每個(gè)孔中只有一個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)； n 軟瓊脂培養(yǎng)法 ：軟瓊脂的半固態(tài)性質(zhì)，使單個(gè)的雜交瘤細(xì)胞在相對(duì)固定的位置上增殖形成細(xì)胞克隆。 n 一般情況下，雜交瘤細(xì)胞的染色體處于不穩(wěn)定狀態(tài)，因此當(dāng)細(xì)胞分裂時(shí)，染色體分配不平衡，易造成雜交瘤細(xì)胞在分裂增殖過(guò)程中失去抗體分泌能力，所以克隆化培養(yǎng) 3～ 5次后，才能獲得穩(wěn)定基因型和穩(wěn)定分泌特異性抗體的細(xì)胞。單克隆抗體的大量制備n 體內(nèi)法：將穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞注入到小鼠腹腔培養(yǎng)，然后從腹水中分離、提取單克隆抗體。 n 細(xì)胞培養(yǎng)：體外克隆培養(yǎng)，再?gòu)呐囵B(yǎng)液中回收產(chǎn)生的抗體。 單克隆抗體的純化n 通過(guò)上述培養(yǎng)之后獲得的培養(yǎng)液或腹水，其中除了單克隆抗體之外，還有無(wú)關(guān)的蛋白質(zhì)等其他物質(zhì)，因此必須對(duì)產(chǎn)品做分離純化。目前，常用的方法有硫酸銨沉淀法、鹽析法、離子交換、凝膠過(guò)濾或親和層析等等。一般是綜合采用幾種方法分步進(jìn)行純化。單克隆抗體的應(yīng)用n 1. 作為親合層析的配體n 單克隆抗體能與其相應(yīng)的抗原特異性結(jié)合，因而能夠從復(fù)雜系統(tǒng)中識(shí)別出單個(gè)成分。只要得到針對(duì)某一成分的單克隆抗體，利用它作為配體，固定在層析柱上，通過(guò)親合層析，即可從復(fù)雜的混和物中分離、純化這一特定成分。如用抗人絨毛膜促性腺激素 (hCG)親合層析柱，就可從孕婦尿中提取到純的 hCG。與其它提取方法 (沉淀法、高效疏水色譜法等 )相比，具有簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、產(chǎn)品活性高等優(yōu)點(diǎn)。2. 作為生物治療的導(dǎo)向武器n 將針對(duì)某一腫瘤抗原的單克隆抗體與化療藥物或放療物質(zhì)連接，利用單克隆抗體的導(dǎo)向作用，將化療藥物或放療物質(zhì)攜帶至靶器官，可直接殺傷靶細(xì)胞。 n 另外，將放射性標(biāo)記物與單克隆抗體連接，注入患者體內(nèi)可進(jìn)行放射免疫顯像，協(xié)助腫瘤的診斷。 治療用脂質(zhì)體 n 單克隆抗體以其特異性強(qiáng)、純度高、均一性好等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、放射免疫分析、免疫組化和流式細(xì)胞儀等技術(shù)，目前，應(yīng)用單克隆抗體制作的商品化試劑盒廣泛應(yīng)用于： ① 病原微生物抗原、抗體的檢測(cè)； ② 腫瘤抗原的檢測(cè)； ③ 免疫細(xì)胞及其亞群的檢測(cè)； ④ 激素測(cè)定； ⑤ 細(xì)胞因子的測(cè)定。 4. 作為研究抗原的探針n 例如前面講的 Western blotting。5. 作為免疫抑制劑n 抗人 T淋巴細(xì)胞單抗 (McAb)作為一種新型免疫抑制劑，已廣泛應(yīng)用于臨床治療自身免疫疾病和抗器官移植的排斥反應(yīng)。注射抗小鼠 Thy1抗原的單抗，可以抑制小鼠同種皮膚移植的排斥反應(yīng)。此外，對(duì)用于同種骨髓移植的供體骨髓，在體外經(jīng)抗 T細(xì)胞單抗加補(bǔ)體處理，能減輕移植物抗宿主病的發(fā)生。謝謝觀看 /歡迎下載BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH
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